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文献和实验培养液肉眼观察无多少改变,只能在镜下发现菌体才知污染。所以,每天应仔细观察。污染后细胞发生病理改变,胞内颗粒增多、增粗,最后变圆脱落死亡,造成实验失败和细胞株 (系) 丢失。 细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显。 如何预防 ● 仔细检查一下器皿的灭菌情况,是否在高压灭菌时放气时间足够、压力足够。 ● 重点检查和储存培养液接触的移液管等物品,连续两次污染
1. 质粒载体构建不成功(目的片段和载体不能成功连接)的常见原因分析 ①DNA 片段纯度差:体系中的杂质会降低连接效率,如果使用不纯化直接连接的方法一直无法成功构建载体,可以考虑进行纯化后再进行连接; ②目的片段和载体片段使用比例悬殊,或者用量过多或过少:目的片段和载体的摩尔比需要控制在一定范围之内,否则会影响连接效率,具体比例可以草靠连接酶说明书; ③连接条件不当:比如连接时间不足、温度不合适、酶失活等,可以通过设置对照组来排查原因; ④引物设计问题:比如通过无缝克隆的方式进行连接,同源
家兔椎间盘(intervertebral disc )细胞的体外培养方法
后,加入消化液,移入到10ml 离心管,培养箱内消化。每隔20分钟,用吸管吹打一次,观察液体有否变浑浊,并取少量液体,在相差倒置显微镜下观察。0.4%台盼兰染色计算活细胞数目。接种密度在105数量级。置于5%CO2孵箱中培养,每隔3天换液。待细胞95%融合时,0.25胰蛋白酶传代分瓶Result: IVD细胞为类软骨细胞,描述:单层细胞形状不规则,可呈三角形、多角形,梭形及不规则形。不同于成纤维细胞。附图: 组织块法
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