TNBS诱导溃疡性结肠炎模型构建

一、实验前准备

1. 动物选择：
   常用SD大鼠或BALB/c小鼠，体重范围根据实验设计调整（大鼠一般180-250g，小鼠18-25g）。实验前需禁食12-24小时，自由饮水以排空肠道。

2. 试剂配制：

   • TNBS溶液：将TNBS溶解于40%-50%乙醇中（乙醇作为有机溶剂破坏黏膜屏障），浓度根据动物种属调整（大鼠常用50mg/kg TNBS，小鼠125mg/kg）。
   • 麻醉剂：常用异氟烷或乙mi麻醉动物以减轻操作应激。

二、造模操作步骤

1. 灌肠给药：

   • 将动物麻醉后，用直径约2mm的软质导管（如硅胶管）经肛门插入直肠，插入深度约大鼠8cm、小鼠4cm，确保溶液分布于结肠。
   • 缓慢注入预先配置的TNBS/乙醇溶液（大鼠0.25-1mL，小鼠0.1-0.2mL）。

2. 体位处理：
   注射后立即将动物倒置（头朝下）30秒至1分钟，防止溶液回流，确保TNBS与结肠黏膜充分接触。

3. 术后护理：

   • 动物恢复期间提供含蔗糖或生理盐水的饮水，防止脱水。
   • 每日监测体重、粪便性状（血便、稀便）、活动状态等疾病活动指数（DAI）。

三、模型验证与评价

1. 时间节点：
   • 急性期：造模后3-7天出现典型症状（体重下降、血便）。
   • 慢性期：持续至第15天左右，评估结肠长度缩短、溃疡面积及组织病理学变化。
2. 评价指标：
   • 宏观指标：结肠长度、溃疡指数、肠壁增厚程度。
   • 微观指标：结肠组织HE染色（黏膜坏死、炎症细胞浸润）、MPO（髓过氧化物酶）活性检测。
   • 免疫指标：Th1/Th2细胞因子（如IFN-γ、IL-4）或Th17/Treg平衡分析。

四、注意事项

1. 剂量优化：不同种属和品系对TNBS敏感性差异大，需预实验确定最佳剂量（如小鼠需更高TNBS浓度）。
2. 乙醇浓度：乙醇浓度过高可能导致黏膜过度损伤，推荐40%-50%乙醇作为溶剂。
3. 操作技巧：灌肠时避免机械损伤肠道，导管需润滑后缓慢插入。

五、模型特点

• 免疫机制：TNBS作为半抗原与宿主蛋白结合引发Th1/Th17型免疫反应，模拟人类克罗恩病特征。
• 局限性：技术操作要求高，个体差异较大，需结合代谢组学或免疫分析提高模型稳定性。