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文献和实验【交流】阳性克隆筛选方法汇总——基于ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9基因敲除方法
保证是必要的,防止产生假阳性的结果。 4、 选择高特异性的错配酶 目前用的比较多的是CEL I和T7E I 两种酶,CELI是植物来源的一种特异性识别碱基错配的酶,活性高,不会产生假阳性。目前市面上只有CruiserTM和Surveyor和两个品牌。其中Surveyor是进口代理产品, 价格较贵,货期较长;CruiserTM价格合适,同时货期短,国内可以2-3天内到货,做到真正质优价廉。 T7E I是NEB的产品,最早并不是为了做基因敲除筛选用的。其最主要的特点是除了识别错配外
颠覆认知!为了生存,癌细胞竟主动断裂 DNA,Science 研究揭开背后机制
研究内容 细胞周期检查点是真核细胞周期中的「监察」机制,可确保细胞复制正常进行。正常细胞受基因毒性伤害时激活 G1 期检查点基因来保护自己,但癌细胞中的这些检查点基因通常失活。因此,癌细胞特别依赖于 G2 期检查点保护自己免受基因毒性伤害。 外源性 DNA 损伤后,CAD 促进内源性 DNA 断裂 为了鉴定外源性损伤后 G2 期检查点的潜在核酸酶调节因子,研究人员筛选了一个癌细胞中已知的人类核酸酶的文库。出乎意料的是,研究人员筛选到关键靶点 CAD,CAD 是在细胞凋亡过程中
的克隆,可以很容易观察到2条分开的条带。 Taq酶,建议是用NEB的Fusion或者Q5,毕竟敲除本身很大可能也就是2-3个碱基的缺失,所以,高保证是必要的,防止产生假阳性的结果。 4、选择高特异性的错配酶; 目前用的比较多的是CEL I和T7E I 两种酶,CEL I是植物来源的一种特异性识别碱基错配的酶,活性高,不会产生假阳性。目前市面上只有CruiserTM和Surveyor和两个品牌。其中Surveyor是进口代理产品, 价格较贵,货期较长
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