pDONR201质粒

Gateway技术：克隆、表达新方法

库。 克隆资源因为已克隆到Gateway改造过的载体，所以可以快速地将基因转到各种表达系统中。 图4 进入Gateway系统的各种路线 * 目前的克隆资源带有attB位点，需要与pDONR质粒重组五、触手可及的最高级表达系统 一旦您构建好Gateway入门克隆，蛋白表达和分析的大门就会向您敞开。使用Gateway技术，您可以进入到几乎是无数种的表达系统。因为没有一个单一的表达系统蛋白适合于每一种蛋白，优化基因表达的最好方法是在多个系统中分析您的蛋白（图5）。 图5 在Gateway

【原创】说一说我用Gateway的经验兼答疑

是线性的，如果用质粒必须做酶切，但是事实证明用超螺旋的质粒结果没有区别。5. 同理，用引物在目的基因上下游加入AttL序列后直接进行LR反应也是可行的，可以省去BP反应相关的材料和费用。但是pDONR系列载体自有其优点（载体小，拷贝数高，卡那霉素抗性，容易测序），所以要按实际情况权衡6. 慢病毒载体的空白质粒有大量的重复序列，久存会导致LR反应成功但是转化后抽不出质粒的情况，需要注意。

生物实验新手上路之GATEWAY技术

的材料和费用。但是pDONR系列载体自有其优点(载体小，拷贝数高，卡那霉素抗性，容易测序)，所以要按实际情况权衡 6. 慢病毒载体的空白质粒有大量的重复序列，久存会导致LR反应成功但是转化后抽不出质粒的情况，需要注意。 Gateway官方简介： Gateway®克隆技术的基础是lambda噬菌体的位点特异性重组反应，一种准确保存遗传信息的有效的自然的生化途径。与传统的需要DNA限制性内切酶、DNA连接酶、凝胶电泳和DNA片段纯化等多个步骤的单调乏味的亚