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- 库存:
现货
- 保质期:
两年
- 供应商:
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件:
4℃
- 规格:
100ml
产品简介
本产品衰老细胞β-半乳糖苷酶固定液是针对衰老细胞的β-半乳糖苷酶染色的专用固定液。绝大多数正常细胞的分裂能力是有限的,在不能分裂后就进入衰老状态,此过程即为细胞衰老(cell senescence),细胞衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制,一般含义是复制型衰老(replicative senescence)。正常细胞经过有限次数的分裂后停止分裂,出现不可逆的生长停滞,此时细胞仍然是存活的,但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化,通常表现为细胞体积变大,与衰老相关的β-半乳糖苷酶为活化状态。β-半乳糖苷酶是细胞溶酶体内的水解酶,通常在pH 4.0时表现活性,但在衰老细胞内该酶在pH 6.0条件下表现活性。衰老细胞β-半乳糖苷酶固定液可较好固定衰老细胞内的β-半乳糖苷酶。
本产品主要成分为0.01M磷酸盐缓冲液,2%甲醛,0.2%戊二全。
使用方法
1. 对于贴壁细胞:6孔板培养好的细胞(或细胞爬片),吸除细胞培养液,用PBS洗涤2次,加入1mL 衰老细胞β-半乳糖苷酶固定液,室温固定15min后去除固定液,用PBS缓冲液清洗后进行衰老细胞β-半乳糖苷酶染色。
2. 对于冰冻切片:冰冻切片室温复温10min。以组化笔画圈,将组织圈出。向组织上滴加适量衰老细胞β-半乳糖苷酶固定液,以完全覆盖住组织为宜,室温固定20min。组织切片经PBS浸泡洗涤后进行衰老细胞β-半乳糖苷酶染色。
储存与运输
常温运输;2-8℃避光保存,有效期两年。
注意事项
1. 请在通风良好的环境下使用,并做好防护,避免吸入。
2. 用完后请及时拧紧瓶盖,防止有效成分挥发。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验本产品主要成分为0.01M磷酸盐缓冲液,2%甲醛,0.2%戊二全
,则生长缓慢,愈伤组织成堆生长。 第二周观察:外周透明部分为衰老细胞,不具分生能力,容易褐化死亡。其特点是细胞呈不规则形,胞质空,核占很小的比例。中央有一定硬度、组织较致密的小白点,为生长点,由分生细胞组成,分生能力很强。其特点是圆形、内含物丰富,核占的比例较大,可见到正在分裂的细胞。 制片步骤: 固定(卡诺固定液固定5-10分钟)→酸解(1N HCL)→水洗→染色(改良苯酚品红染色3-5分钟)→压片→镜检 评分
纤维染色 染色 网状纤维呈黑色或者黑褐色,背景呈棕黄色。 β-半乳糖苷酶染色 染色 β-半乳糖甘酶染色,衰老细胞通常体积变会大,表达pH6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。染色中以X-ga1(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)为底物,在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下,半乳糖苷键被水解生成深蓝色产物,光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。 镀银染色 染色 甘氨酸银又叫镀银。染色将神经突触,神经
,15500×g离心30分钟,取上清,进行蛋白质定量。单向定量电泳取蛋白质分子量标准物,第一次按1∶2稀释后,以后按1∶3倍比例逐级稀释,经4级稀释后,取15μl上样液上样,β-半乳糖苷酶上样量依次分别为1μg、0.24μg、0.062μg、0.0156μg、0.004μg。作12g/L SDS-聚丙烯酰胺凝胶单向电泳,同时电泳4份胶,显色以确定染色灵敏度。双向电泳取300μl样品液沿水化盘中槽的边缘自左向右线性加入,将17cm IPG胶条胶面朝下置于槽中,静置45分钟后覆盖矿物油,在20℃溶胀11~16
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