包涵体分离缓冲液，RC62364-500ml

【建议】关于如何提蛋白质纯化问题（附例）

8.0，20mMTris，0.5N NaCl，8M尿素，40mM 咪唑 柱洗脱液：如pH8.0，20mMTris，0.5N NaCl，8M尿素，200mM 咪唑 柱洗脱方法：如分段洗脱，线性梯度洗脱等 3、建议说明纯化规模和纯化设备，例如： 一次纯化所用的菌体量：如10g湿菌体或500ml摇瓶发酵菌等 破菌缓冲液体积：如150ml 包涵体洗涤，溶解液体积：包涵体洗涤液每次150ml，共洗涤3次；包涵体用50ml包涵体溶解液溶解，搅拌过夜 纯化用柱类型：如XK26/20、或自制、或国产16

凝胶过滤层析

，如果要进行精细分离纯化，首选Supedex或Superose等高分辨系列的凝胶过滤填料。 2.选择合适的分离范围，要确保待分离的蛋白在所选的填料的分离范围之内。 3.根据样品体积选择合适的层析柱体积，在进行精细分离时凝胶过滤上样量不超过5%柱体积，一般建议为2%～3%柱体积，因此如24 mL层析柱一般建议上样体积为不超过500 μL。120 mL层析柱建议上样体积为不超过5 mL。在进行组份分离如脱盐时，最大上样量不超过30%柱体积，如5 mL 脱盐柱最大上样体积一般不超过1.5 mL。 4.在预

对比 Strep-tag 与 His-tag 系统异同点？

为His-tag 与 Strep-tag® 系统的耐受缓冲液对比 如果分离纯化膜蛋白或包涵体时，则纯化过程需要涉及到变性条件。 Strep-tag®系统最多允许的尿素浓度为6M，盐酸胍为1M，而His-tag 则为8M和6M。如若需要增加蛋白的溶解度，使用去垢剂，则两种系统均可兼容Triton-X100，Tween 20和Nonidet P40。 但不是所有的蛋白过表达后都在包涵体内，且膜蛋白仅占细胞表达蛋白的20%-30%。 因此，如果纯化过程需要考虑特殊的纯化条件，两种系统是都可以选择的。但如果比较