A549细胞敲除hEGFR基因细胞系

【原创】基因组编辑三大工具ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9筛选基因敲除细胞系阳性克隆Protocol

基因组编辑三大工具ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9 筛选基因敲除细胞系阳性克隆Protocol 上海南方模式生物研究中心 技术顾问 周效华   从2011年科学家实现TALEN技术，2013年科学家实现CRISPR/Cas9技术，这些技术的迅速成熟都给基础生物学研究、临床医学研究提供了更为方便和快捷的分子生物学工具。技术进步必将在未来给科学研究及基因治疗研究带来更为广泛的发力！这在2014年以来的频频出现的Cas9技术在各个领域的应用进展中可以清晰看到。欢迎感兴趣的朋友联系我交流

细胞也有身份证么？有啊，包括他的基因突变、表达、耐药，等等……要是不知道这些怎么选来做实验呢？

：也可以直接选，比如我们选一个A549细胞系：这里就会显示出A549细胞系的信息，包含有该细胞系的一系列数据库，比如药物敏感性的数据库，甲基化数据库，CRISPR敲除数据库，表达谱等等。首先会有一个总览，并且显示这些数据库的具体数据，数据都是可以下载的：右边显示的这个词云图，其实是和A549相关的主要突变驱动基因。点击信片数据的话，可以进入类似Array Express的界面，去下载数据：药物敏感，也是通过药物大规模筛选获得的结果：可以按照Z score来排序，找到A549最敏感的药物，以及靶点

轻松学会寻找 crisprcas9 目的基因 CDS 序列

最近 CRISPR/Cas9 基因敲除技术可谓风靡全世界的实验室，CRISPR 被称为规律成簇间隔短回文重复，其实际上就是一种基因编辑器，是细菌用以保护自身对抗病毒的一个系统。后来，研究人员发现，它似乎是一种精确的万能基因武器，可以用来删除、添加、激活或抑制其他生物体的目标基因。由于其相对于前几代基因敲除技术而言更为简便高效。所以一经问世便受到科研界的热捧。利用 Cas9 质粒建立 knock-out 细胞系实验过程主要有以下几步：1. 确定待敲除基因的靶位点；2. 设计识别靶位点识别的一对