HepG2细胞敲除hGPX8基因细胞株

你已经是个成熟的细胞了，该学会自己做实验了

之降解，是在 RNA 水平上的降低目的基因的表达。此时，基因敲除稳转株可以很大程度上规避这个问题。因为基因敲除稳转株是在基因组水平上通过基因序列的改变使其基因功能丧失，在敲除细胞中通常不会检测到靶蛋白的表达，而且敲除效果稳定，不能恢复，也就是永久性敲除了。但是基因敲除稳转株缺点是操作周期长，费用多，效率低。如何选择基因下调表达的方式，就要综合考虑了。那么同样是稳定株，单克隆？混合克隆？要怎么选？细胞：当需要去除细胞群体干扰因素的时候，推荐使用单克隆稳定细胞株，其基因组背景相对单一，对实验

【原创】基因组编辑三大工具ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9筛选基因敲除细胞系阳性克隆Protocol

这些方面的进展。关于这些技术的具体原理和操作细节，请查看我之前的帖子附件详细介绍。不清楚的请联系我咨询。此贴主要谈一谈在用这些技术进行癌细胞株阳性细胞克隆筛选的过程中，如何进行阳性克隆筛选，为初次接触这些新技术的研究者提供一些参考意见。一般CRISPER-Cas9质粒转染后，采用有限稀释法接种到96孔板中长克隆，待到单个细胞长到几百到1000个细胞左右时，显微镜下仔细观察每一个孔的细胞，若发现非单克隆的细胞需要将其标注出来剔除筛选之外。传两代后，取出单个克隆的一部分细胞提取基因组DNA。分析敲除位点

【求助】可以使目标蛋白不表达的方法

gene targeting载体，得到小鼠模型后取其细胞做实验，这种方法一般都是完全的缺乏内源性基因的表达，目前也可以在人细胞株（HCT116）或者大鼠上做。这种方法对于一些对于细胞存活至关重要的基因有些问题，常常出现小鼠的胚胎死亡或者敲除细胞株的逐渐死亡。因此有条件性敲除（Cre小鼠）和杂合缺失等替代方法。具体方法要说的太多，你也可以查阅一下资料。 敲除后得到稳定表型的动物或者细胞，可以从整体水平观察该基因缺失后对机体各个系统功能的变化，更为全面，有可能发现更多的现象。但是这些细胞或个体