塑料定量模版刮板

我的奋斗史：realtime-PCR 达人养成记（上）

以及重复性的问题？ 阈值一般设在最大荧光信号的 1/5 或是 R2 最大时的 CT 值为阈值标准，根据不同的仪器选择。关于重复的问题，通常相同试剂、相同模版、同一个反映条件 CT 不要相差一个循环以外，比如复孔。 扩增效率的问题 lightcycle 扩增效率在 1.9～2.05 之间认为结果是可以应用的，有可比性。其它仪器是 90-105%。 关于梯度稀释问题 模版 10 倍稀释后，每个梯度 CT 值相差要控制在 3.3～3.5 个循环之间。如果 CT 值超过

micro RNA(miRNA)

的的Northern Blot方法是是用探针检测固相支持物（膜）上的目标分子，由于用探针检测液相中的目标分子远比检测固相中的目标更为灵敏，这里推荐一种基于核酶保护分析方法改进的新方法――将同位素标记好的小分子RNA探针和待检测样品混合杂交，未杂交的RNA和多余的探针用单链核酸酶消化，然后使核酸酶失活，并纯化杂交的RNA分子，最后通过变性胶电泳放射自显影检测结果。这个基于液相杂交的新方法不但操作简单而快速，而且灵敏度极高――可以半定量检测少至10ng总RNA模版中的小分子RNA，或者说，可以检测attomole

RNAi技术专题之：体外转录合成双链RNA

合成。最适用于：已经找到最有效的siRNA的情况下，需要大量siRNA进行研究不适用于：筛选siRNA等长时间的研究，主要原因是价格因素2.体外转录通过体外转录的方法可以合成siRNAs，这样的成本相对化学合成法而言比较低，是一种性价比高的筛选siRNAs的好方法。更重要的是采用这种方法能够比化学合成法更快的得到siRNAs。以Silencer siRNA Construction Kit为例，一旦得到DNA Oligo模版（这个还是需要DNA合成的，不过DNA合成的成本就比较低了），只要24小时