- ￥8007 - 30839
- Clontech
- 634795///634796
- 2026年04月21日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
24 Rxns/96 Rxns
| 规格： | 24 Rxns | 产品价格： | ￥8007.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 96 Rxns | 产品价格： | ￥30839.0 |
| SMART-Seq mRNA HT LP & SMART-Seq mRNA HT | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 图1. SMART-Seq mRNA HT LP的技术流程 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ 数据展示： | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 注：SMART-Seq mRNA HT LP和SMART-Seq mRNA HT是SMART-Seq HT PLUS Kit和SMART-Seq HT Kit的等效替代品。 以下展示来源于SMART-Seq HT Kit和 SMART-Seq HT PLUS Kit的数据。 |
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| ● SMART-Seq HT有更简洁的操作流程 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 图2. SMART-Seq v4和SMART-Seq HT工作流程的比较 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| SMART-Seq HT（右）是由SMART-Seq v4方法（左）改进而来的一个手动操作时间更短的高通量工作流程。使用FACS方法获得单细胞，SMART-Seq HT试剂盒只需3个操作步骤即可制备cDNA，而SMART-Seq v4试剂盒需要6步。SMART-Seq HT工作流程的一个重要步骤是一步RT-PCR，即使用一步RT-PCR缓冲液，进行高效的反转录和PCR扩增cDNA的过程。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ● SMART-Seq HT和SMART-Seq v4之间的基因表达分析比较 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 分别使用SMART-Seq v4和SMART-Seq HT从10 pg小鼠脑总RNA制备cDNA后，使用Illumina的Nextera XT DNA Sample Prep Kit制备文库，之后在NextSeq上进行测序（2 x 75 bp）。结果显示，使用SMART-Seq v4和SMART-Seq HT试剂盒鉴定的转录本高度重叠。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ● 从高灵敏度、高重复性的cDNA合成出发，构建更高品质Illumina文库 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| (比较数据来源于Takara Bio USA, Inc.) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Takara科学家从10 pg小鼠脑total RNA起始，采用SMART-Seq HT完成cDNA合成。随后分别使用SMART-Seq Library Prep Kit（SSlp）与市面上较常用的A公司试剂盒构建文库，并比较性能差异。 从测试数据中可以看出，SS-HT PLUS Kit所建文库的产量是A公司Kit产量的5倍，而更高的文库产量更适于高通量型Illumina测序仪，如Novaseq。 两种方法所建文库随后用Nextseq 500完成测序，并对TPM(Transcripts per million)≥0.1的基因数进行统计。SS-HT PLUS文库能比A公司文库多检出10%的基因，从同样的cDNA起始能“捕获”更全的信息！ |
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文献和实验催化这些反应的酶的聚合和链置换活性，封闭寡核苷酸经过大量修饰以确保其性能。 在第二链合成过程中使用封闭寡核苷酸允许在 3' mRNA-Seq 方法中阻断高丰度序列文库片段的产生。这增加了mRNA 的样本的复杂性，并提高了基因检测能力，而无需增加测序深度。3' mRNA-Seq 的常用封闭寡核苷酸混合物可以去除源自珠蛋白 mRNA 分子， 以进行全血样品中进行高性价比的基因表达分析。 6. 小RNA 提取过程中大量转录本的排除 小 RNA (sRNA) 是基因表达的重要调节因子，并参与
转录、PCR、逆转录等原理上并无多大差异，只是采用的荧光素种类更多，这可以满足不同来源样品的平行分析。样品制备的常用试剂：对于检测表达的芯片，样品制备通常涉及mRNA的纯化，cDNA的合成，体外转录或者PCR，标记等步骤。而对于SNP或者突变检测，则往往涉及Genomic DNA纯化和PCR标记等步骤。1. RNA纯化：从样品中分离纯化高质量的RNA是非常重要的第一步。由于RNA样品中的DNA碎片会影响后继的PCR反应，所以要彻底除去样品中的DNA。通常用mRNA纯化的方法可以除去DNA片断
随着对细胞生理研究的不断深入，从整体水平分析一个细胞群体内的基因表达已无法满足科研需求，科学家们开始关注单细胞研究。10x Genomics 单细胞 3’端转录组测序及单细胞 V(D)J 测序，利用其微流控芯片技术，能让研究者从一个细胞群体中获得高质量的单细胞表达情况，帮助研究者们更准确的解析单个细胞的行为。10x 单细胞转录组细胞异质性（heterogeneity）：同一类型细胞中可以存在很多不同的基因型或者亚型的细胞，因此同一种类型细胞在不同的个体甚至同一个体中存在分子生物学、表型、功能
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