- ￥698 - 2088
- 碧云天（beyotime）
- D8025
- 2025年11月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
50次/200次
| 规格： | 50次 | 产品价格： | ￥698.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 200次 | 产品价格： | ￥2088.0 |
碧云天研发生产的人端粒长度染料法qPCR检测试剂盒，即Human Telomere Length SYBR Green qPCR Kit，也称人端粒长度染料法qPCR试剂盒、端粒相对长度检测试剂盒、Human Telomere Length qPCR Kit with SYBR Green，是一种通过染料法qPCR (Quantitative PCR)扩增端粒与内参基因DNA，并快速、高效、灵敏地定量不同人类样品的端粒相对长度的试剂盒。本产品为防污染型，含有优化比例的高品质UDG酶和dUTP，可有效消除PCR扩增过程中带来的产物污染问题造成的假阳性或CT值偏低。
端粒(Telomere, Tel)是真核生物染色体末端的由短串联DNA重复序列(TTAGGG)及其相关蛋白组成的保护性复合物。随着细胞分裂的进行，端粒的长度也会随之缩短。端粒极短的细胞就会进入衰老状态，这是一种不可逆的细胞生长停滞状态。因此，端粒的长度可作为判断细胞是否进入衰老状态的重要标志[1]。端粒可以作为受环境暴露和生活经历累积影响的生物标志物，也是重大疾病的风险因素[2]。越来越多的证据表明，端粒缩短对健康状况有负面影响，并与包括衰老和癌症在内的许多健康问题有关。因此，端粒长度的量化在细胞生物学研究的许多方面具有重要意义，包括染色体不稳定性、DNA修复、衰老、细胞凋亡、细胞功能障碍和致癌等[3]。
本试剂盒提供了qPCR实验所需的预混液BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, UDG)和特异性引物，预混液包含了BeyoFast™ Taq DNA Polymerase、UDG酶、PCR Buffer、dNTPs、dUTP、SYBR Green I荧光染料、稳定剂和镁离子等所有的通用组分。本试剂盒设计了两对引物，一对是基于端粒重复序列设计的端粒引物(Telomere Primer Mix)；一对是基于12号染色体上编码酸性核糖体磷酸蛋白(Acidic ribosomal phosphoprotein, PO)的单拷贝基因(Single copy reference, SCR)而设计的内参引物(Control Primer Mix)，用于数据的均一化定量。
本试剂盒检测灵敏，扩增效率高，所用引物组检测1.25-20ng/μl范围内的基因组DNA样品时，扩增效率可达95%。不同浓度梯度的HeLa细胞基因组DNA分别使用Telomere Primer Mix和Control Primer Mix扩增，并绘制标准曲线。结果显示两个标曲均呈现良好的线性关系，表明本试剂盒具有稳定的扩增效果，端粒相对长度定量准确度高。使用Telomere Primer Mix的扩增曲线及标准曲线可参考图1，使用Control Primer Mix的扩增曲线及标准曲线可参考图2。
图1.碧云天人端粒长度染料法qPCR检测试剂盒(D8025)中Telomere Primer Mix对于不同浓度梯度的HeLa细胞基因组DNA的扩增曲线及标准曲线。NTC, No Template Control。实测数据可能会因样品、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。注：由于端粒序列的串联重复特性，端粒引物组可能在NTC中形成微量的引物二聚体。NTC组Ct值为28或更大就表示反应中有引物二聚体的形成，可以作为阴性结果处理。
图2.碧云天人端粒长度染料法qPCR检测试剂盒(D8025)中Control Primer Mix对于不同浓度梯度的HeLa细胞基因组DNA的扩增曲线及标准曲线。NTC, No Template Control。实测数据可能会因样品、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
本试剂盒提供了Low ROX和High ROX，广泛兼容于无需ROX和需要Low ROX或High ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪。ROX的作用是用于校正与PCR无关的荧光波动，从而最大限度减少孔间差异。这种差异可能由多种因素引起，如移液误差及样品蒸发等。不同的荧光定量PCR仪对ROX的要求不同，请根据实际所用仪器在配制反应体系时选择添加高浓度ROX (High ROX)、低浓度ROX (Low ROX)或不加ROX。常用仪器所需ROX类型请参考如下表格。
| 添加ROX类型 | 适用PCR仪 |
| 不需添加 | Bio-Rad: CFX384, CFX96, MiniOpticon, iCycler IQ, MyiQ and iQ5; Eppendorf: Mastercycler ep realplex and realplex2 s; Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 6000; Roche LightCycler 480; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR |
| Low ROX | ABI: 7500 (Fast), ViiA 7, QuantStudio 6 and 7 Flex Systems; Stratagene: Mx3000P, Mx3005P and Mx4000; Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 3000; Bio-Rad/MJ: Chromo4, Opticon 2 and Opticon |
| High ROX | ABI GeneAmp 5700; ABI PRISM 7000, 7700; ABI 7300, 7900HT (Fast); ABI StepOne (Plus) |
本试剂盒如果用于常规的96孔板qPCR检测(建议反应体系为20µl)或384孔板qPCR检测(建议反应体系为10µl)，本产品小包装分别可以进行50次和100次检测，中包装分别可进行200次和400次检测。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D8025S-1 | BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, UDG) | 500μl |
| D8025S-2 | Telomere Primer Mix (20X) | 50μl |
| D8025S-3 | Control Primer Mix (20X) | 50μl |
| D8025S-4 | Ultrapure Water | 400μl |
| D8025S-5 | Low ROX (50X) | 20μl |
| D8025S-6 | High ROX (50X) | 20μl |
| - | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D8025M-1 | BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, UDG) | 2ml |
| D8025M-2 | Telomere Primer Mix (20X) | 200μl |
| D8025M-3 | Control Primer Mix (20X) | 200μl |
| D8025M-4 | Ultrapure Water | 1.5ml |
| D8025M-5 | Low ROX (50X) | 80μl |
| D8025M-6 | High ROX (50X) | 80μl |
| - | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20ºC保存，一年有效。其中BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, UDG)、Low ROX (50X)、High ROX (50X)须避光保存，并尽量避免反复冻融。
注意事项：
使用前请务必确保试剂完全融化，充分混匀后使用。混匀过程尽量避免产生气泡。
BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, UDG)、Low ROX (50X)、High ROX (50X)中含有荧光染料，保存本产品或设置PCR反应体系时应避免强光照射，以尽量避免荧光淬灭问题。
经测试，本产品反复冻融10次对使用效果无显著影响，但仍需尽量避免反复冻融。反复冻融可能使产品性能下降。
qPCR检测是超高灵敏度的检测，请尽量在标准的PCR实验室中进行检测。PCR反应设置区域须尽量避免各种可能的扩增产物的污染。虽然本产品为防污染型，但仍建议勿在PCR反应设置区域撕开PCR封板膜或打开PCR管盖，PCR产物宜密封后按扩增后产物要求处理，以避免超高浓度的PCR产物污染实验环境。
建议使用带滤芯的吸头配制PCR体系，这样可以最大限度的避免污染导致的假阳性。推荐BeyoGold™无菌滤芯盒装吸头(FTIP631/FTIP635/FTIP638)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验实时荧光定量 PCR 技术（Quantitative Real-time PCR，简称 qPCR）是在 PCR 扩增过程中，通过实时监测荧光信号的变化，达到对待检测样本中初始模板定量分析的方法。当前 qPCR 技术被广泛应用于临床疾病诊断，动物疾病监测，食品安全分析等领域。随着 2020 年新冠疫情在全球的蔓延，qPCR 技术更是因其检测通量高，速度快，操作简便等优势成为新冠病毒核酸检测的有效方法被众人所熟知。 那么为了得到可靠、准确的检测结果，我们需要注意哪些方面呢？其实决定一次实验成功
成功做完了逆转录，这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多，即使使用了 qPCR 预混液，也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列（Q411 /Q421 /Q431 /Q441）提供不同颜色的试剂，利用移液过程中的变色效应，追踪移液过程，可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时，引物设计需遵循以下原则：引物长度 18～25bp，产物长度 80～300bp，GC 含量 40～60
是由于体系内引物与引物纠缠比引物与模板结合更容易导致的，可以尝试提高模板浓度、退火温度或者降低引物浓度来进行改善； 另外，当目的基因表达量极低时，染料法容易形成引物二聚体产物影响实验结果，此时，建议使用探针法定量。 （2）杂峰在主峰之后，非引物二聚体 上图这种情况就是非特异性扩增，可能是引物特异性不好引起的，也可能是空气中有气溶胶污染所导致。 大家可以先增加退火温度再试试看，如果没有改善，那么就需要重新更换引物啦。为了避免这种麻烦，小 V 建议大家在进行 qPCR 实验之前，就对自己的引物
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