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KAPA HyperExplore MAX 3Mb T2, 96 rxn
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上海博耀商贸有限公司
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96
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文献和实验LightCycler通过实时荧光PCR技术进行DNA甲基化分析
,在饱和的DNA结合染料存在的情况下进行PCR反应,在扩增后进行高分辨熔解曲线分析,HRM分析的特点为可以区分扩增产物中少至1个碱基变化的序列差异,从而通过尿嘧啶/胞嘧啶的差异判断扩增子来源于甲基化还是非甲基化的初始模板变异体。MS-HRM可评估引物之间整条扩增子的甲基化状态。由于它是一种闭管方法,可初步快速评估甲基化。相比于传统的方法,它的成本低廉,分辨率高,通量灵活(最多一次筛查384个样本,最少几个样本),并且准确率大大提升。结合标准品的特征熔解曲线,还可以对样本中存在的甲基化DNA比率进行基本
手把手教你利用 CRISPR-Cas9 系统精准敲除靶标基因
重要,两个方向都可以选择。图 7 Guide RNA 设计流程选择一对 Guide RNA 来敲除基因敲除基因组一段序列,选择一对 Guide RNA 就显得非常重要。根据前人的实验,敲除基因 1Mb 并没什么问题。我们一般建议敲除 10Kb 以下。 选择一对 Guide RNA 的标准如下, ( 图 8 and 图 9 是两个实例)如果目的基因比较短,在 10kb 左右 ,建议敲除全基因,甚至包括启动子。如果目的基因比较长,建议敲除比较重要的外显子。目的基因比较长,也可以敲除全部的启动子和部分的基因
Kit 中测序液 4.0μl终体积 10μl(4)用微量取样器将反应物充分混合后,加 20μl 石蜡油覆盖。3.2 热循环反应该反应中降温时间非常关键(约1℃/s)。因此,可使用Perkin-Elmer 序列的热循环仪(PCR 仪,如 480,2400 或 9600)。以下所描述的操作均基于Perkin-Elmer Model 480 热循环仪。将反应管放入热循环仪中,按以下程序进行热循环反应:(1)96℃ 1 秒钟96℃ 30 秒钟(2)50℃ 1 秒钟50℃ 1 分钟(3)60℃ l 秒钟60℃
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