裂解无菌脱纤维豚鼠血

小鼠脾脏单细胞悬液制备流程及注意事项

。 加入2 mL 1×红细胞裂解液重悬细胞，室温裂解2~3 min后，立马加入10 mL PBS，300 g离心5 min，弃上清。 用细胞染色缓冲液重悬脾脏细胞，将细胞悬液用200目筛网再次过滤后计数, 并调整细胞浓度至1×107/mL。 b) 吹打法 小鼠颈椎脱臼处死，置于75%乙醇浸泡5 min后，取出小鼠，置于无菌操作台上，左腹侧朝上。 小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏。 脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露出脾脏，用镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面

小鼠骨髓单细胞悬液制备流程及注意事项

），剪去两端软骨，露出红色的骨髓腔。注意在该过程中应保留尽可能多的骨髓腔。 拿一支1 mL的无菌注射器，吸取1 mL PBS，轻轻插入骨髓腔，冲洗骨髓腔以获得骨髓。重复2~3次，可冲出绝大部分细胞。冲洗完后，用移液器轻轻吹打细胞，将细胞团吹散。 将冲洗液用200目的滤网过滤，滤液收集于15 mL离心管中，300 g离心5 min，弃上清。 用细胞染色缓冲液重悬细胞，细胞计数，并调整细胞浓度至1×107/mL。 注意事项： 骨髓样本细胞分群明显，可以裂解红细胞，也可不裂解。如需裂解红细胞，可以加入

抗补体实验检测与补体结合的CIC

新鲜脱纤维羊血或Alsever液保存的羊血（4℃可保存3周） 用生理盐水洗2次，第三次用缓冲盐水，2500r/min离心lOmin，取压积红细胞用缓冲盐水配成2%悬液。为使SRBC浓度标准化，可将2%悬液用缓冲盐水稀释25倍，于分光光度计（542nm）测定其透光率（以缓冲盐水校正透光率至100%）。每次实验所用SRBC浓度（透光率）必须一致，否则应予调整；（4）致敏SRBC 2%SRBC悬液加等量1：1000溶血素，混匀，37℃水浴10rain；（5）豚鼠血清 取3只成年健康豚鼠血清混合分装