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流式课堂 | 裂红 or 分离液?外周血不同制备方法应用场景
外周血样本采集完毕后,我们需要对其中的待测单细胞进行提取。针对外周血样本,最常使用的样本制备方法有两种: 一. 裂红法 利用红细胞裂解液,去除红细胞 二. Ficoll 法 利用不同细胞的沉降系数差异,进行梯度密度离心,提取 PBMC 两种方法分别在什么场景下应用?接着往下看。 裂红法 裂红法,即裂解样本中的红细胞。血液中的红细胞比白细胞多 10-100 倍,红细胞数量过多,会影响细胞群体的分析。因此,我们在做血液样本检测时,经常需要裂解红细胞。 裂红前 裂红后 01
科镊子提起腹膜,用 5mL 注射器往小鼠腹腔注射 2.5mL 预冷 PBS(勿扎到脏器),轻揉小鼠腹部1~2 min。注射器回抽腹腔灌洗液,收集于15mL 离心管中。 重复第 5 步 5 次,冲洗腹腔,可观察到冲洗液逐渐澄清。 将收集的腹腔灌洗液 300 g 离心 5 min,弃上清。 用细胞染色缓冲液或者含 10% 胎牛血清的 1640 培养液重悬细胞。 进行细胞计数,并调整细胞浓度至 1×107/mL。 注意事项: 若第 7 步离心弃上清后发现细胞沉淀中有较多红细胞,且检测目的细胞非红细胞,先
基的离心管中,轻轻震荡混匀后,放置于 37℃ 培养箱中解离 1 h。每隔15min 轻轻震荡或吹打混匀一次。 5、加入 8ml 预冷的 DMEM/F12(含 10%FBS)终止消化。 6、将悬浮液经过 70μm 细胞筛网过滤,收集解离的细胞。 7、将过滤的细胞悬液在 4℃ 条件下 450g 离心 5min。 8、若细胞沉淀有明显的红色,则将细胞重悬于 5ml 的红细胞裂解液中,冰上孵育 10min 使红细胞裂解。 9、向细胞悬液中加入 5ml DMEM/F12 冲洗细胞一次,离心收集细胞沉淀后,加入
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