ACD抗凝粉剂(B)优惠价格

ACD抗凝粉剂(B)血液保存液，3.5mlACD抗凝剂(B)+20ml血,2-6℃保存21天。主要由柠檬酸钠、柠檬酸、葡萄糖等组成。配置后可于4℃冰箱保存3个月，如果使用量少，可先适当分装保存，避免污染。

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细胞活力检测试剂盒实验操作
A. 荧光显微镜检测
1. 准备 2μM Calcein AM 和 4μM EthD-1 的染色工作液
a) 将 Calcein AM 和 EthD-1 原液放置于室温融化，使其恢复室温备用。
b) 将 5μl 4 mM Calcein AM 和 20 μl 2 mM EthD-I 加入到 10 ml PBS 或其他无血清培养基中，涡旋混匀，配制好的工作液，室温避光放置，可直接用于细胞染色。
（注：由于 Calcein AM 在水溶液中易水解，因此 Calcein AM 工作液必须当天现配现用。不同的细胞最佳染色效果不一样，建议首
次实验摸索最佳的 Calcein AM 和 EthD-1 的浓度，用最少的染色试剂达到最佳的染色效果。可以在 0.1~10μM 范围内进行摸索）。

2. 细胞准备
a) 对于悬浮细胞，1000 rpm 室温离心 5 分钟，去除上清，收集细胞；用 1×PBS 清洗细胞 1~2 次，1000 rpm 室温离心 5 分钟，去除上清，保留沉淀进行染色实验；
b) 对于贴壁细胞，直接去除培养基，用 1×PBS 清洗细胞 1~2 次（注：吸弃上清的时候尽量不要吸到细胞，应尽量去除培养基，以去除残留酯酶与血清的影响）。
3. 染色
a) 向 PBS 清洗后的细胞中加入染色工作液。对于悬浮细胞，加入适量（例如 0.5~1 ml）染色工作液后，用手轻弹离心管，然后使用移液枪轻轻的吹打混匀，
并使细胞密度控制在 1~10×105/ ml。对于贴壁细胞，加入适量的染色工作液，轻轻晃荡细胞培养板，以均匀覆盖所有细胞，
通常 96 孔板每孔加入 100μl，24 孔板每孔加入 250μl，12 孔板每孔加入 500μl，6 孔板每孔加入 1 ml。
b) 室温或 37℃ 避光孵育 20 分钟（注：不同的细胞染色效果可能会有不同，因此可根据染色效果，调整优化染色时间）。
c) 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察标记的细胞。
B. 流式细胞仪检测
1. 准备 0.08μM Calcein AM 和 0.8μM EthD-1 的染色工作液
a) 将 Calcein AM 和 EthD-1 原液放置于室温融化，使其恢复室温备用。
b) 用于流式细胞仪所需染料浓度过低，直接添加量极少，易引入加大误差，建议先将 Calcein AM 稀释后进行操作。Calcein AM 母
液稀释至10μM：如取 2μl 4 mM Calcein AM 加入到 800μl PBS 或其他无血清培养基中，混匀后备用。
c) 将 8μl 10μM Calcein AM 和 4μl 2 mM EthD-I 加入到 10 ml PBS 或其他无血清培养基中，涡旋混匀，配制好的工作液，室温避
光放置，可直接用于细胞染色。
（注：由于 Calcein AM 在水溶液中易水解，因此 Calcein AM 工作液必须当天现配现用。此外流式细胞仪灵敏度很高，且不同的流式
细胞仪灵敏度不同，为了达到最佳染色效果，Calcein AM 与 EthD-I 均可以在 0.05~8μM 范围内进行摸索。）

Cell preparation
a) For suspension cells, centrifuge at 1000 rpm for 5 min at room temperature, remove the supernatant, and collect the cells; Wash the cells with 1× PBS 1~2 times, centrifuge at 1000 rpm for 5 minutes at room temperature, remove the supernatant, and retain the pellet for staining experiments;
b) For adherent cells, remove the medium directly, wash the cells with 1× PBS 1~2 times (Note: Try not to aspirate the cells when aspirating the supernatant, and remove the medium as much as possible to remove the influence of residual esterase and serum).
3. Dyeing
a) Add the staining solution to the PBS-washed cells. For suspension cells, add an appropriate amount (e.g., 0.5~1 ml) of staining solution, flick the centrifuge tube with your hand, and then use a pipette gun to gently pipette to mix.
And control the cell density at 1~10×105/ml. For adherent cells, add an appropriate amount of staining solution and gently shake the cell culture plate to evenly cover all cells.
Typically add 100 μl per well for 96-well plates, 250 μl per well for 24-well plates, 500 μl per well for 12-well plates, and 1 ml per well for 6-well plates.
b) Incubate at room temperature or 37°C for 20 minutes in the dark (Note: different cells may have different staining effects, so the optimal staining time can be adjusted according to the staining effect).
c) Fluorescence microscopy or laser confocal microscopy to observe labeled cells.
B. Flow cytometry assays
Prepare staining working solutions of 0.08 μM Calcein AM and 0.8 μM EthD-1
a) Melt Calcein AM and EthD-1 stock solution at room temperature and allow it to return to room temperature for later use.
b) The concentration of the dye required for flow cytometry is too low, and the amount of direct addition is very small, which is easy to introduce large errors, so it is recommended to dilute Calcein AM before operation. Calcein AM female
Dilute to 10 μM: Add 2 μl of 4 mM Calcein AM to 800 μl PBS or other serum-free medium, mix well and set aside.
c) Add 8 μl of 10 μM Calcein AM and 4 μl of 2 mM EthD-I to 10 ml of PBS or other serum-free medium, vortex to mix, prepare the prepared working solution, and avoid room temperature
Light placement, which can be used directly for cell staining.
(Note: Since Calcein AM is easily hydrolyzed in aqueous solution, Calcein AM working solution must be prepared and used on the same day.) In addition, flow cytometry is highly sensitive and has different flow cytometry
The sensitivity of the cytometer is different, and in order to achieve the best staining effect, both Calcein AM and EthD-I can be explored in the range of 0.05~8μM. ）

制胶流程
将制胶玻璃板装配好，以一块 0.75/1.0/1.5mm 的 mini 胶为例：
1）下层胶混合溶液配制：取等体积的胶液 A 和缓冲液 A，各 2.0/2.7/4.0 ml 加入到容器中，混匀，在混合溶液中加入 40/60/80μl 的促凝剂
轻轻摇晃混匀，避免出现气泡；
2）将混匀后的步骤 1 溶液灌注到制胶玻璃板中，根据所用梳齿长度不同，灌注的液面应在插入的梳齿顶端以下 0.5 cm 为宜（为避免损耗，此步骤配制的溶液为过量，请勿全部注入）；
3）根据需要可选择是否用去离子水封闭（封闭可获得更加平整的上下层胶分界线），如不选择封闭可直接进行步骤 4，如选择封闭可在完成步骤 2 后立即在下层胶液面缓缓注入去离子水至与玻璃胶板短板上沿齐平，等待下层胶凝固后（室温 20℃以上约 10min，20℃及以下应酌情延长 1-5min）倒去上方去离子水，进行步骤 4；
4）上层胶混合溶液配制：取等体积的胶液 B 和缓冲液 B（缓冲液 B 使用前请摇匀），各 0.5/0.75/1.0 ml 加入到容器中，混匀，在混合溶液中加入 10/15/20μl 的促凝剂 ，轻轻摇晃混匀，避免出现气泡；
5）将混匀后的步骤 4 溶液轻缓注入制胶玻璃板中至与玻璃胶板短板上沿齐平，插入梳齿（如不选择封闭，由于下层胶混合溶液尚未凝固，灌注上层胶混合溶液时一定要轻缓，避免将上层胶混合溶液冲入到下层混合溶液胶中）；
6）室温静置等待上 / 下层胶凝固（20℃以上约 10min，20℃及以下应酌情延长 1-5min）即可轻轻拔出梳子进行电泳。

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