pCMV-VSV-G质粒

Hematopoietic Stem Cell Targeting with Surface-Engineered Lentiviral Vectors

construct with 8.6 µg of the lentiviral gene-transfer vector and the two glycoproteins: VSV-G (1.5 µg) and TPOHA (1.5 µg) or VSV-G (1.5 µg) and SCFSUx (1.5 µg). Cotransfect TPOHA with the neuraminidase-expressing plasmid (pCMV-NA) to allow

多重PCR同时检测口蹄疫病毒、猪水疱病病毒和水疱性口炎病毒

45 s，30个循环；72 ℃延伸10 min。取10 μL PCR产物在20 g/L琼脂糖凝胶电泳检测。 1.7 多重PCR扩增 分别将上述1.5合成的FMDV，SVDV和VSV cDNA产物作为模板，在同一管内同时加入3对引物进行PCR扩增。反应条件及PCR反应参数如上1.6。PCR扩增结束后取10 μL扩增产物于20 g/L的琼脂糖凝胶（含0.5 μg/ mL溴化乙锭）中电泳检测。  

实验操作篇

质粒转染细胞的效率受到多种因素的影响，如细胞的类型，细胞的状态，转染时细胞的密度，转染的方式（电转或化转），DNA 的质量、转染试剂的选择等。从质粒角度来看，超螺旋比例高，且内毒素残留低的质粒会更有利于提高细胞转染的效率。 pCMVβ DNA 用不同试剂盒提取，转染  Huh-7 细胞，转染效率对比   5. 质粒酶切有问题，切不开或者酶切有杂带   酶切切不开可能跟酶本身状态、酶切缓冲液、酶切温度以及质粒本身都有关系。从酶切条件考虑，在确保酶活性的前提下，选择合适的酶切缓冲液、温度