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思拓凡
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重组蛋白在设计、构建时已融入纯化构想,可以通过亲和标签的作用进一步实现高纯度的纯化。
Cytiva针对MBP标签或Strep标签重组蛋白纯化应用提供了3步骤纯化平台方案:第1步骤使用标签亲和层析捕获蛋白,第2步骤根据表面不同的特性选用适当的离子交换剂分离蛋白质,第3步骤使用分子筛层析去除聚集体等杂质。
同时,Cytiva也提供了不同纯化方案的层析介质与相关耗材。
| 属性 | 类别 | 货号 | 名称 |
| STEP 1 | MBP标签蛋白纯化预装柱 | 28918778 | MBPTrap 5 x 1mL |
| 28918780 | MBPTrap 5 x 5mL | ||
| Strep (II)标签蛋白纯化预装柱 | 28907546 | StrepTrap HP 5 x 1mL | |
| 28907548 | StrepTrap HP 5 x 5mL | ||
| 29401320 | StrepTrap 5 × 1 mL | ||
| 29401323 | StrepTrap 5 × 5 mL | ||
| STEP 2 | Capto离子交换系列 | 28934388 | HiTrap Capto IEX Selection Kit |
| 11001303 | HITRAP CAPTO Q, 5X5ML | ||
| 17544123 | HITRAP CAPTO S, 5X5 ML | ||
| 28916540 | HiTrap Capto DEAE, 5X5ML | ||
| 11003275 | HITRAP CAPTO MMC, 5X5ML | ||
| 17371755 | HiTrap Capto S ImpAct 5x5mL | ||
| 28405846 | 5x5 ml Hitrap Capto adhere | ||
| 17531602 | Capto Q 100 ml | ||
| 17546802 | Capto SP ImpRes, 100 mL | ||
| 17531702 | Capto MMC 100ml | ||
| 17546855 | HiTrap Capto SP ImpRes 5x5mL | ||
| 17547055 | HiTrap Capto Q ImpRes 5x5mL | ||
| STEP 3 | 凝胶过滤预装柱 | 29148721 | Superdex 75 Increase 10/300 GL |
| 28990944 | Superdex 200 Increase 10/300 GL | ||
| 29091596 | Superose 6 Increase 10/300 GL | ||
| 28989333 | HiLoad 16/600 Superdex 75 pg | ||
| 28989335 | HiLoad 16/600 Superdex 200 pg | ||
| 29323952 | HiLoad 16/600 Superose 6 pg | ||
| 28989334 | HiLoad 26/600 Superdex 75 pg | ||
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文献和实验了Strep-Tactin®,改进后得到的Strep-Tactin®XT (XT意指extreme tight),与Twin-Strep-tag亲和力更上一层楼。目前得到的这个纯化系统,其中标签与配体的键结力几近共价,但结合仍保持可逆,更适用于样本体积大,或是膜蛋白、低丰度蛋白、金属蛋白等有挑战性蛋白的纯化了。 纯化步骤 总体来说,Strep标签蛋白的纯化步骤与传统的亲和层析纯化步骤并无太大差别,但优点是整个纯化在生理条件下进行,而且耐受多种的纯化条件,像是高盐、去垢剂、变性条件等均可使用。 值得
作为亲和标签(后者包含2个Strep-tag®II,中间加入spacer间隔开来)。这两种标签都可与改造后的链霉亲和素(Streptavidin)上的生物素结合位点相结合,通过使用脱硫生物素或生物素,即可将Strep-tag®标签蛋白洗脱下来。 由于His-tag系统具有吸附量大,性价比高,和可以在变性条件下进行蛋白纯化等优点,使其为大众所熟知。而Strep-tag®系统则可以获得高纯度的蛋白,但其同时也可以耐受多种缓冲液的使用。下面让我们对二者进行各项数据进行比较: 耐受的纯化条件 下表
老话说的好,巧妇难为无米之炊,要做好标签蛋白质的纯化实验,首先得选择合适的填料和预装柱,以达到事半功倍的效果。我们今天就来看看 Cytiva 标签蛋白填料的大家族,一起 pick 最适合您蛋白质研究的填料吧! 蛋白标签(Protein Tag) 所谓蛋白标签(Protein Tag)是指利用 DNA 体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪、和纯化等。常用的标签有His、GST、Strep、MBP、Flag 和组合式的双标签。Cytiva 可为
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