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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
500
- 英文名:
buffalo derived ingredients Detection Kit
- 保质期:
12个月
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
50T
【产品名称】
商品名称:水牛源性成分(buffalo)核酸检测试剂盒(探针法荧光PCR)
Name :buffalo derived ingredients Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】25T/盒、50T/盒
【预期用途】 动物源性成分广泛分布于食品、饲料、化妆品等,与人们的生活息息相关,其中食品和饲料所占的比例最 大。肉及肉制品掺假成为世界各国共同关注的热点问题,肉食品及其饲料的安全隐患直接关系到人类的安危。 近几十年来,以 PCR 技术为核心的动物源性成分检测获得了广泛应用。 本试剂盒适用于动物组织以及食品、饲料等样本中牛源性成分的检测。
【检验原理】 本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术,设计一对牛源性成分基因保守区特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光 PCR 技术对牛源性成分基因保守区的 DNA 进行体外扩增检测,从而达到快速检测之目的, 用于科研实验中对可疑感染病料的病原学检测。

【试剂组成】
说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。
【储存条件及有效期】 -20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。
【适用仪器】 ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】 取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g。
【保存和运输】 采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h;若需长期保存,应放置-70℃以下保存,冻融不超过 3 次。

【使用方法】
1. 样品处理(样本处理区)
1.1 样本前处理 对于饲料样品,按照《GB/T 14699.1-2005 饲料 采样》进行采样及处理。 取动物组织及其制品、食品,手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨, 待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。
1.2 核酸提取 推荐采用上海烜雅生物科技有限公司生产的核酸提取或纯化试剂(磁珠法或离心柱法)进行核酸提取, 请按照试剂说明书进行操作。
2. 试剂配制(试剂准备区) 根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 10 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:
将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,20μL/管。
3. 加样(样本处理区) 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀, 短暂离心。
4. PCR 扩增(核酸扩增区)
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;
4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL; 荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光,选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置:
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定(请参照各仪器使用说明书进行设置,以分析 ABI7500 仪器为例) 反应结束后自动保存结果,根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值(用户可根据实际情况自行调整,Start 值可设在 3~15、End 值可设在 5~20,使阈值线位于扩增曲线指数期,阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线),点击 Analyze 自动获得分析结果。
5.2 结果判断 阳性:检测通道 Ct 值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线; 阴性:样本检测结果无 Ct 值,且无特异性扩增曲线; 可疑:样本检测结果 35
5.3 质控标准 阴性质控品:无特异性扩增曲线或无 Ct 值显示; 阳性质控品:扩增曲线有明显指数增长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
6. 检测方法的局限性
1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
3. 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
4. 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
5. 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
6. 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
7. 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
1. 所有操作严格按照说明书进行;
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
3. 反应液应避光保存;
4. 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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商品名称:水牛源性成分(buffalo)核酸检测试剂盒(探针法荧光PCR)
Name :buffalo derived ingredients Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】25T/盒、50T/盒
【预期用途】 动物源性成分广泛分布于食品、饲料、化妆品等,与人们的生活息息相关,其中食品和饲料所占的比例最 大。肉及肉制品掺假成为世界各国共同关注的热点问题,肉食品及其饲料的安全隐患直接关系到人类的安危。 近几十年来,以 PCR 技术为核心的动物源性成分检测获得了广泛应用。 本试剂盒适用于动物组织以及食品、饲料等样本中牛源性成分的检测。
【检验原理】 本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术,设计一对牛源性成分基因保守区特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光 PCR 技术对牛源性成分基因保守区的 DNA 进行体外扩增检测,从而达到快速检测之目的, 用于科研实验中对可疑感染病料的病原学检测。

【试剂组成】
| 包装规格 | 50T/盒 |
| buffalo 反应液 | 500μL×2 管 |
| 酶液 | 50μL×1 管 |
| buffalo 阳性质控品 | 50μL ×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 |
【储存条件及有效期】 -20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。
【适用仪器】 ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】 取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g。
【保存和运输】 采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h;若需长期保存,应放置-70℃以下保存,冻融不超过 3 次。

【使用方法】
1. 样品处理(样本处理区)
1.1 样本前处理 对于饲料样品,按照《GB/T 14699.1-2005 饲料 采样》进行采样及处理。 取动物组织及其制品、食品,手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨, 待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。
1.2 核酸提取 推荐采用上海烜雅生物科技有限公司生产的核酸提取或纯化试剂(磁珠法或离心柱法)进行核酸提取, 请按照试剂说明书进行操作。
2. 试剂配制(试剂准备区) 根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 10 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:
| 试剂 | buffalo 反应液 | 酶液 |
| 用量 | 19μL | 1μL |
3. 加样(样本处理区) 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀, 短暂离心。
4. PCR 扩增(核酸扩增区)
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;
4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL; 荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光,选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置:
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
| 1 | 1 cycle | 95℃ | 2min | 否 |
| 2 | 40 cycle | 95℃ | 15sec | 否 |
| 60℃ | 30sec | 是 |
5.1 结果分析条件设定(请参照各仪器使用说明书进行设置,以分析 ABI7500 仪器为例) 反应结束后自动保存结果,根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值(用户可根据实际情况自行调整,Start 值可设在 3~15、End 值可设在 5~20,使阈值线位于扩增曲线指数期,阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线),点击 Analyze 自动获得分析结果。
5.2 结果判断 阳性:检测通道 Ct 值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线; 阴性:样本检测结果无 Ct 值,且无特异性扩增曲线; 可疑:样本检测结果 35
6. 检测方法的局限性
1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
3. 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
4. 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
5. 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
6. 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
7. 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
1. 所有操作严格按照说明书进行;
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
3. 反应液应避光保存;
4. 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验该产品被引用文献
[1] GB/T 38164-2019, 常见畜禽动物源性成分检测方法 实时荧光 PCR 法[S].
文献支持
水牛源性成分(buffalo)核酸检测试剂盒(探针法荧光PCR)
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