BeyoColor™等温扩增变色检测试剂盒(LAMP/RT-

碧云天研发生产的BeyoColor™等温扩增变色检测试剂盒(LAMP/RT-LAMP法, 含UDG) (BeyoColor™ Colorimetric LAMP/RT-LAMP Assay Kit with UDG)，是一种通过直接或反转录后环介导等温扩增(Loop Mediated Isothermal Amplification, LAMP)法扩增DNA并通过反应体系的颜色变化检测样品中是否有目的DNA或RNA的试剂盒。本试剂盒中的Bst酶具有良好的逆转录酶活性，不仅可用于对DNA样品的检测也可以用于RNA样品的检测。本试剂盒采用了dU掺入和UDG酶防止等温扩增产物污染技术，可快速、有效、高灵敏度地检测样品中的目的DNA或RNA，并且采用可视化变色技术，无需电泳，通过肉眼观察颜色变化即可判断结果。本试剂盒通过自行设计等温扩增引物，可以用于检测样品中是否存在病原体、微生物等，例如生物样品中是否存在特定病原体的感染或微生物的污染等。

等温扩增技术(Isothermal amplification technology)是核酸体外扩增技术，其反应过程始终维持在一定的恒定温度下，通过添加不同活性的酶和各自特异性引物进行核酸的快速扩增[1]。本试剂盒采用的是环介导核酸等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)，其特点是针对靶基因的不同区域设计4-6条特异引物，使用链置换DNA聚合酶(Bst DNA Polymerase)启动DNA的合成，形成哑铃状互补链，并进一步通过连续链置换进入循环扩增阶段，扩增的最后产物是具有不同个茎环结构、多环花椰菜样结构的DNA的混合物。LAMP仅需在等温条件下(如60-65ºC)保温30-60分钟，即可完成核酸扩增反应。与常规PCR相比，LAMP不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，具有简单、快速、灵敏性高、特异性强等特点[2]。

本试剂盒灵敏度高，反应时间短。本试剂盒的灵敏性比传统的PCR方法高2-5个数量级，通过阳性质粒计算检测下限约为20-200 copies/μl。且仅需1个小时就能完成检测反应。

本试剂盒采用可视化变色技术，无需电泳，通过肉眼观察颜色变化即可判断结果。本试剂盒优化了指示剂染料，样品中的目的DNA片段被快速大量扩增后，反应管内液体的颜色由紫罗兰或蓝紫色变成天蓝色或深天蓝色即为目的DNA阳性。

图1. 碧云天BeyoColor™等温扩增变色检测试剂盒(LAMP/RT-LAMP法, 含UDG) (D8012)的检测效果图。左图为阴性样品，右图为阳性样品。本图仅供参考，不同批次的产品，阴性和阳性的颜色可能会与本图略有差异，实际检测时阳性和阴性相比有明显的颜色变化即可。

本试剂盒采用防污染技术，有效避免污染。本试剂盒使用了dU和热敏型UDG酶，可以使扩增产物中掺入dU并且在等温扩增前30ºC孵育5-15分钟可有效消除等温扩增过程中带来的产物污染问题。在进行等温扩增时，热敏型UDG酶会被失活，从而不会干扰后续的等温扩增检测。

本试剂盒含Bst酶、UDG酶、PCR Buffer、dNTP、dUTP、可视化染料，只需加入适量特异引物、待测样品和水即可检测目的DNA/RNA。本试剂盒中的Bst酶具有较好的逆转录酶活性，在60-65ºC可高效合成cDNA，因此对于RNA样品，无需单独的逆转录步骤。

本试剂盒提供了阳性对照Positive Control，可用于确定试剂盒是否能正常工作。Positive Control含阳性DNA模板和对应的引物，检测的目的DNA为GFP，阳性对照中包含了靶向GFP的相应检测引物和相应的GFP DNA。建议每次检测都设置阳性对照。

本产品如果用于常规的20µl反应体系，小包装可以进行25次检测，中包装可进行100次检测，大包装可进行500次检测。

包装清单：

保存条件：

-20ºC保存，一年有效。其中LAMP Master Mix with UDG (2X)需避光保存。尽量避免反复冻融。

注意事项：

使用前需确保试剂完全融化，上下颠倒轻轻混匀后使用。混匀过程中尽量避免产生气泡。

经测试，本产品反复冻融10次对使用效果无显著影响，但仍需尽量避免反复冻融。反复冻融可能使产品性能下降。

等温扩增是超高灵敏度的检测，请尽量在标准的PCR实验室中进行检测。等温扩增反应设置区域须尽量避免各种可能的扩增产物的污染。尽管本试剂盒采用UDG酶防污染技术，但请仍勿打开PCR管盖，等温扩增产物宜密封后按扩增后产物要求处理，以避免超高浓度的扩增产物由于气溶胶等因素污染实验环境。

本产品含颜色指示剂，未进行反应前，如果加入样品后颜色和阴性、阳性颜色有明显差异，则需要稀释样品或者使用DNA提取试剂盒处理样品，或者需要适当调整样品的pH至接近中性。

本等温扩增体系需要高浓度的二价离子，样品中不能含有高浓度的EDTA等金属离子螯合剂。

建议使用带滤芯的吸头配制等温扩增体系，可以最大限度的避免污染导致的假阳性。推荐BeyoGold™无菌滤芯盒装吸头(FTIP631/FTIP635/FTIP638)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。