黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选试剂盒(WST-8法)

碧云天研发的黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选试剂盒(WST-8法)，即Xanthine Oxidase Inhibitor Screening Kit with WST-8，也称XO Inhibitor Screening Kit with WST-8或XOD Inhibitor Screening Kit with WST-8，是一种基于WST-8的显色反应，利用吸光度检测，简单、快速、灵敏地用于黄嘌呤氧化酶抑制剂高通量筛选的试剂盒。

黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase, XO or XOD)是体内核酸代谢中的一种重要酶，可以催化次黄嘌呤氧化为黄嘌呤，并能进一步催化黄嘌呤氧化为尿酸，同时产生过氧化氢以及超氧化物阴离子的一系列氧化反应，在包括人类在内的一些物种中的嘌呤分解代谢中起着重要作用[1]。在人类及其它灵长类动物中，XO通常存在于血清、肺、肝脏和肠黏膜中。在啮齿类动物中，XO在大部分组织中均有表达。血液中XO的活性通常都很低。当感染甲型流感时，血清及肺部的XO活性会增加[2]。当肝功能受损时，XO会大量释放到血液中，因此检测血液中XO水平被作为一个评估严重肝损伤(例如黄疸)的灵敏指标[3]。XO也可能与痛风的发病机理相关，黄嘌呤氧化酶是尿酸形成的代谢途径，因此使用黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌呤醇用于治疗痛风。此外，研究显示抑制XO活性可缓解心血管疾病及慢性阻塞性肺疾病[4,5]。

本试剂盒的检测原理请参考图1。底物(Substrate)在XO催化作用下产生的超氧化物阴离子(O2.-)，随后与WST类指示剂(Indicator)反应产生水溶性的甲臜染料(Formazan dye)。甲臜染料在450nm左右有最大吸收峰，通过测定450nm处的吸光度就可以非常灵敏地检测黄嘌呤氧化酶活性。如果在反应中加入黄嘌呤氧化酶抑制剂(Inhibitor)，甲臜染料的生成就会被抑制，甲臜的生成量与抑制剂的抑制效果成反比，这样就可以检测出抑制剂的抑制效果。

图1.碧云天黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选试剂盒(WST-8法) (S0111)的原理图。

本试剂盒含抑制剂阳性对照，使用便捷。本试剂盒提供XO检测缓冲液(XO Assay Buffer)、黄嘌呤氧化酶(XO)、XO底物(XO Substrate)、阳性对照非布司他(Febuxostat)及可以被XO催化产生荧光的指示剂(XO Indicator)。阳性对照Febuxostat是一种选择性的非嘌呤类XO抑制剂，临床上常用于痛风及高尿酸血症的治疗。通常Febuxostat的IC50约为2nM-20nM，使用本试剂盒检测Febuxostat的效果请参考图2。

图2.碧云天黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选试剂盒(WST-8法) (S0111)检测Febuxostat的效果图。图中Febuxostat的IC50约为5nm。实测结果可能会因样品和检测条件等的不同而存在差异，图中数据仅作参考。

本试剂盒检测速度快，检测灵敏度高。整个检测过程约40分钟即可完成。本试剂盒中XO和XO Substrate等的使用量进行了优化，不仅能检测出IC50很低的抑制剂，也能检测出IC50较高的抑制剂。

碧云天同时提供基于Amplex Red法的黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选试剂盒(S0113)。

按照使用说明操作，用于96孔板检测时，本试剂盒的小包装可以进行100次检测。

包装清单：

保存条件：

-20ºC保存，一年有效。XO Indicator须避光保存。

注意事项：

XO Assay Buffer需要完全解冻并平衡至室温后再使用，否则会影响检测结果。XO使用时应在冰上进行。使用完毕后各试剂应立即按照试剂盒保存的条件进行保存。

待测抑制剂的溶剂可能会对检测产生干扰，推荐以XO Assay Buffer、Milli-Q级纯水(ST872)、DMSO (ST038)为溶剂配制、稀释待测抑制剂，并在对照孔中添加与抑制剂等体积的溶剂以排除干扰。如果使用其他溶剂请确保在最终的反应体系中溶剂浓度不应超过5%，如超过5%，请同时设置溶剂对照组以测试溶剂对酶活性的影响，排除干扰。

XO、XO Indicator、XO Substrate等试剂的量均比较少，在使用前请先适当离心，然后适当混匀后再使用。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。