禽流感病毒H5亚型RT-PCR检测试剂盒

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非洲猪瘟病毒 LAMP 试剂盒使用说明书案例
非洲猪瘟(African Swine Fever、ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus、ASFV) 引起猪的一种急性、热性、高度接触传染性疾病，病死率几乎高达 100%，ASF 最近在我国爆发，给我国养猪业造成重大损失，因此 ASFV 的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公司开发了简单快捷的 ASFV 可视化 LAMP 检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品 DNA。
2.用 LAMP 恒温扩增法扩增 ASFV 特异片段，不需要荧光 PCR 等贵重仪器。同时扩增时间只需要 1 小时，尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。
3.检测灵敏性比 PCR 高 10 倍以上。
4.特异性高，由于使用四条针对 ASFV 保守基因的特异引物，比使用 2 条引物的PCR 专一性更高。
5.提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
6.每个反应的线性范围：10E2-10E7 拷贝/μL，最低灵敏度：10 拷贝/μL。
本试剂盒足够做 50 次 20μL 体系的 LAMP 扩增。本产品只能用于科研。

组份与规格

使用方法    

一、样品 DNA 的制备
1.用自选方法纯化细菌样品 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容，包括本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout，可去公司的官网搜索。
2.如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。如果样品使用量为 XmL，则在 XmL 水中加 10μLMRSA LAMP阳性对照的 10000 倍稀释液作为样品制备阳性对照，样品制备阴性对照是
直接用 X mL 水作为阴性对照，然后和 N 个样品一起进行细菌 DNA 提取

操作，得到 N+2 个 DNA 样品。二、LAMP（20μL 体系）
3.反应设置：如果有 N+2 个 DNA 纯化样品，则最好设置 N+4 个 LAMP 扩
增，增加 LAMP 阴性对照和阴性对照各 1 个。在 N+4 个PCR 管中加入下列成分：

4.混匀，此时反应液呈现非常浅的蓝色，由于是否有反应是跟阴性对照和反应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反应后比对。
5.置于 25℃5 分钟（让 UNG 灭活可能的 LAMP 的污染），然后放 63℃扩增
60 分钟。如果是在 PCR 仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙，并且在管中加 50uL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率）。
6.80℃10 分钟灭活 Bst DNA 聚合酶和 UNG 酶。
7.将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察，观察反应液颜色并用手机照相留底。
8.实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色，无模板的阴性对照将呈现无色或非常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9 号为阴性，10 号为阳性，此处的 9 号和 10 号跟下步的电泳照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样品）：