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Cytiva/GE GUIDE RING 货号:19502101 货号: 19-5021-01 ge q 5离子交换柱 ge resource离子柱







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文献和实验Studies of the Ubiquitin Proteasome System
from RING‐ and PHD‐Finger E3s Materials Putative E3 expressed as a GST fusion in bacteria ( protocol 41 ). Glutathione‐Sepharose (GS) beads (GE Healthcare) 50 mM Tris⋅Cl, pH
,可能是大肠杆菌自身有那么一种蛋白酶,破菌释放后就正好会攻击我的宝贝蛋白。而这种蛋白酶是金属蛋白酶,加EDTA后把它的枪栓(金属离子)给卸了,我的蛋白小命也就保全了,哈哈。第二次在SDS-PAGE上看到降解时,心里就不慌了。 可能有战友会问,his-tag的蛋白加了EDTA后还怎么过Ni柱啊,恭喜你,问对了。我的解决方案是先过离子交换柱。EDTA带负电荷,用Q/DEAE吸附EDTA,或用SP柱吸附目标蛋白后,再透析一下,过Ni柱纯化。爱探险的dora跳着舞,成功
过高?超声功率?外源蛋白酶污染?……最后用EDTA解决了。在破菌缓冲液中加0.5mM的EDTA就不会降解了。推测原因,可能是大肠杆菌自身有那么一种蛋白酶,破菌释放后就正好会攻击我的宝贝蛋白。而这种蛋白酶是金属蛋白酶,加EDTA后把它的枪栓(金属离子)给卸了,我的蛋白小命也就保全了,哈哈。第二次在SDS-PAGE上看到降解时,心里就不慌了。 可能有战友会问,his-tag的蛋白加了EDTA后还怎么过Ni柱啊,恭喜你,问对了。我的解决方案是先过离子交换柱。EDTA带负电荷,用Q/DEAE吸附
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