蛋白质分析的高效液相色谱法

蛋白质分析的高效液相色谱法通过采用液体流动相，将样本中的蛋白质组分分离至色谱柱中，根据蛋白质的不同特性（如大小、疏水性、电荷等）进行分级洗脱。与传统的分析方法相比，蛋白质分析的高效液相色谱法不仅提高了分析速度，还显著提高了检测精度和准确性。近年来，随着色谱技术的不断进步，蛋白质分析的高效液相色谱法已经从传统的反相色谱（RP-HPLC）扩展到离子交换色谱（IEX-HPLC）、尺寸排阻色谱（SEC-HPLC）以及亲和色谱（AC-HPLC）等多种技术。反相色谱法主要利用蛋白质表面疏水性差异进行分离，广泛应用于天然蛋白质及其衍生物的纯化与分析。离子交换色谱法则基于蛋白质分子间电荷差异进行分离，经常用于蛋白质的纯化和质量控制。尺寸排阻色谱主要通过蛋白质分子的大小差异进行分离，适用于蛋白质的分子量分析和聚集状态研究。亲和色谱法利用生物分子间特异性结合进行分离，是蛋白质-配体相互作用研究的利器。蛋白质分析的高效液相色谱法(HPLC)广泛应用于蛋白质的分离、纯化、鉴定和定量。随着检测技术的进步，HPLC仪器的灵敏度、分辨率和自动化程度大幅提升，高效液相色谱法在蛋白质研究中具有不可替代的地位。目前，各大研究机构和企业纷纷投入资源，推动高效液相色谱法在蛋白质分析领域的创新与发展。凭借经验丰富的科研团队和多年蛋白质组学技术积累，百泰派克生物科技为广大科研工作者提供HPLC蛋白质分析服务，能够根据客户需求量身定制高效液相色谱方案。

 

高效液相色谱法在蛋白质分析中的应用可追溯至20世纪70年代。在现代生物医学研究中，蛋白质功能异常往往与多种疾病相关。因此，通过蛋白质分析的高效液相色谱法对蛋白质进行精确的定性和定量分析，不仅有助于疾病的早期诊断和治疗，还能为新药的开发提供数据支持。高效液相色谱法广泛应用于制药、生物技术和食品安全领域，从多肽和蛋白质的纯化，到复杂蛋白质混合物的分离和鉴定，该方法均显示出卓越的性能。尤其是在蛋白质相互作用研究、蛋白质组学和代谢组学等高通量分析领域，蛋白质分析的高效液相色谱法是必不可少的工具。通过对蛋白质结构和功能的深入研究，我们能够更好地理解生命过程及其调控机制。

 

一、技术流程

蛋白质分析的高效液相色谱法需要经过样品的制备、柱前处理、样品的注入、柱分离及检测几个步骤。

1、样品的制备需要确保样品的纯度和稳定性。常需进行浓缩和纯化以去除杂质，以免杂质干扰分析结果。

2、选择合适的色谱柱和流动相是关键。色谱柱的选择主要依据待测蛋白质的性质，如分子量大小、电荷状态和疏水性等。流动相的配制则需根据色谱柱和待分析蛋白质的特性精确调整，常用的流动相有水-yǐjīng体系和磷酸盐缓冲液等。通过优化色谱柱和流动相的选择，可以提高分离的效率和分辨率。

3、进行分离分析时，需要注意控制色谱条件，如流速、柱温和检测波长等。流速过快可能导致分离效果不佳，而过慢则影响分析效率。柱温的选择影响蛋白质的稳定性和分离效果，需根据实际情况合理设定。检测方法上，多数蛋白质分析采用紫外检测，检测波长的选择需根据蛋白质的紫外吸收特性确定。为了确保检测的灵敏度和准确性，通常会使用紫外检测器（UV）或质谱检测器（MS）来对洗脱组分进行监测。

 

二、常见问题及注意事项

常见问题包括样品损失、柱堵塞和分离效率不佳等。为应对这些问题，需优化样品处理流程和色谱条件。在进行蛋白质分析的高效液相色谱法时，需要注意样品的稳定性和柱寿命。高盐浓度或极端pH值可能会损害色谱柱，因此需要进行适当的稀释和缓冲。此外，为了确保数据的可重复性，需保持仪器的清洁和稳定操作，并定期进行校准。

 

百泰派克生物科技拥有领先的色谱技术平台，凭借专业的团队和丰富的项目经验，为客户提供定制化的HPLC蛋白质分析解决方案。我们致力于通过高质量的服务帮助客户在生物医药、食品安全和环境科学等领域取得突破性进展，欢迎广大科研人员与我们合作，共同推动蛋白质分析技术的发展与应用。

 

百泰派克生物科技--生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务商

 

相关服务：

HPLC蛋白质分析

 

其他相关服务

 

 

特色项目

 

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

 

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

 

 

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

 

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

 

 

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

 

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

 

 

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

 

 

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

 

 

六、基因敲除

百泰派克生物科技（BTP）采用优化的CRISPR/Cas9系统为您提供高通量基因敲除服务，包括病毒包装、质粒制备、Cas9浓度测试等，为您解决选择哪个细胞进行敲除、可不可以敲除、如何敲除以及敲除效率如何等关键问题。可进行单/多基因敲除、移码突变和大序列敲除。我们的人全基因组基因敲除阵列Array文库覆盖了完整的人类全基因组，全基因组阵列敲除库已在人原代细胞全部完成高内涵筛选的验证，超过80%以上的靶点达到70%以上的敲除效率。

 

※服务优势：

1.样本适用性强

适用于人、小鼠的细胞系，原代细胞，免疫细胞及iPS细胞等。

2.基因必要性及表达量分析

在进行基因敲除实验前，我们会基于生物信息学和蛋白质组学数据对不同细胞中基因必要性及表达量进行分析，确保实验的可行性，降低实验风险。

3.gRNA无需从头设计和验证

我们完成了人类全基因组gRNA的全部验证，与药物相关的靶点也完成了PCR测序验证，无需针对客户的靶点设计预实验进行gRNA验证，大大缩短了项目周期。

4.高通量高效率

我们采用优化的CRISPR/Cas9系统进行高通量基因敲除，多个sgRNA/靶基因设计保证高敲除效率，超过80%靶点敲除效率在70%以上，短期内（10天内）即可提供高敲除效率的KO pool，满足绝大多数的应用场景。

5.敲除效率双验证

基因敲除后，我们采用WB实验中抗体KO验证的shǒuxuǎn方法——Sanger测序和深度蛋白质组学技术对敲除效率进行双验证，数据真实性的双重保障。

 

 

百泰派克生物科技七大检测平台

 

 

 

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!