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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20°C储存,避免反复冻融;超低温运输
- 英文名:
Thermostable RNase T1
- 库存:
现货
- 供应商:
上海阿拉丁生化科技股份有限公司
- CAS号:
9026-12-4
- 规格:
R749974-100KU/R749974-500KU
| 规格: | R749974-100KU | 产品价格: | ¥599.90 |
|---|---|---|---|
| 规格: | R749974-500KU | 产品价格: | ¥2429.90 |
基本描述
产品名称:热稳定核糖核酸酶T1
规格或纯度:BioReagent, 无DNA酶, 分子生物学级, EnzymoPure™, ≥95%(SDS-PAGE), 500 U/μL
产品介绍:
|
性能阐述:
Thermostable RNase T1 是一种基于 RNase T1 经过蛋白定向进化得到的耐热突变体。与野生型RNase T1 相比,ThermostableRNase T1 能够在 50°C的条件下保持 100% 的活性,而野生型在同样的温度下活性至少下降 50%。更高的反应温度有助于充分打开 RNA的二级结构,减少或避免其对酶切的影响,从而使酶切过程更加彻底。
活性定义
活性单位 (U) 是指在 37°C,pH7.5 条件下,以酵母 RNA 为底物,使 A260 变化 1.0 所需要的酶量。
适用范围:
1. 去除 DNA 中的 RNA;
2. 去除重组蛋白中的 RNA;
3. RNA 测序;
4. 用于核糖核酸酶保护试验(与 RNase A结合使用)
5. 测定不含 G 或低 G 含量 DNA 模板的转录水平。
适用方法
1、反应体系
组分 体积 终浓度
ssRNA
1~10 μg
50~500 ng/μL
10× RNase T1 Buffer
2 μL
1×
RNase Inhibitor (40 U/μl)*
1 μL
2 U/μL
Thermostable RNase T1 (500 U/μl)
0.4 μL
10 U/μL
Nuclease-Free Water
up to 20 μL
/
注: 为避免RNase A等环境中的RNase污染使底物RNA降解,建议在反应 体系中加入RNase Inhibitor,底物RNA应在RNase Inhibitor 加入并混匀之后加入。
2.、推荐的反应条件
50℃孵育15 min。可根据实际情况适当延长或缩短孵育时间以达 到最佳酶切效果。
注意事项:
1. Thermostable RNase T1 的热失活是可逆的,建议通过柱纯化或酚/氯仿抽提的方法去除 Thermostable RNase T1。
2. RNase 相关实验请在通风橱或特定区域进行,以避免对其他实验产生影响。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套及口罩进行实验操作。
级别:BioReagent, 无DNA酶, 分子生物学级, EnzymoPure™
产品规格参数
浓度:500 U/μL
储存条件:-20°C储存,避免反复冻融
运输条件:超低温运输
稳定性与储存:Store at -20℃ long term (24 months). Upon receipt, it is recommended to aliquot. Avoid freeze/thaw cycle.
CAS编号和信息:9026-12-4
单位定义:One unit of the enzyme causes an increase in absorbance of 1.0 at 260nm in 15min when yeast RNA is hydrolyzed at 37℃ and pH7.5.
功能和特点
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文献和实验统不需要放射性方法中对同位素的谨慎操作,也不需要荧光法或化学发光技术的昂贵试剂。另外,也不需要象大多数荧光法那样用仪器来检测序列条带。Taq DNA 聚合酶在95℃时极强的热稳定性。本系统利用的测序级Taq DNA 聚合酶是一种Taq DNA聚合酶的修饰品,对于双链DNA 模板有非常好的效果,具有高度的准确性,能产生均一的条带,且背景低。SILVER SEQUENCETM 系统包含被修饰的核苷酸混合物,如7-去氮dGTP(7-deaza dGTP,或dITP)替代dGTP 可清除由GC 丰富区域
水浴20分钟。 9、加入等体积的饱和酚/氯仿,振荡混匀,4℃下12000g离心10分钟。 10、取上层水相, 加入等体积氯仿,振荡混匀,4℃下12000g离心10分钟。 11、取上层水相,加入1/5体积的4mol/L NaCl和10% PEG(分子量6000), 冰上放置60分钟。 12、4℃下12000g离心15分钟, 沉淀用数ml 70%冰冷乙醇洗涤,4℃下12000g离心5分钟。 13、真空抽干沉淀,溶于500ml TE或水中。 [注意] 1. 提取过程中
1/5体积的4mol/L NaCl和10% PEG(分子量6000), 冰上放置60分钟。 12、4℃下12000g离心15分钟, 沉淀用数ml 70%冰冷乙醇洗涤,4℃下12000g离心5分钟。 13、真空抽干沉淀,溶于500ml TE或水中。 [注意] 1. 提取过程中应尽量保持低温。 2. 加入溶液II和溶液III后操作应混和,切忌剧烈振荡。 3. 由于RNA酶A中常存在有DNA酶,利用RNA酶耐热的特性,使用时应先对该酶液进行热处理(80℃ 1小时),使DNA酶失活。
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