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- 烜雅生物
- XY-PCR152C
- 国产
- 2026年03月05日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
280
- 英文名：
Goat Pox Virus Detection Kit
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
【产品名称】
通用名称：山羊痘病毒（GTPV）核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）
Name ：Goat Pox Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】50T/盒
【预期用途】 山羊痘是由山羊痘病毒（Goat Pox Virus）引起山羊急性热性接触性传染病，世界动物卫生组织将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。病羊是 主要的传染源，主要通过呼吸道感染，也可以通过损伤的皮肤和粘膜入侵机体。饲养和管理人员，以及被污染的饲料、垫草、用具、皮毛产品和体外寄生虫等均可称为传 播媒介。在自然条件下，山羊痘病毒只能使山羊发病。本病传播快、发病率高、不同品种、性别和年龄的羊均可感染。本病一年四季均可发生。 本试剂盒适用于检测山羊皮肤病变组织、淋巴结、水泡液等样本中的山羊痘病毒，用于山羊痘病毒感染的辅助诊断。
【检验原理】 本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对山羊痘病毒特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对山羊痘病毒的核酸进行体外扩增检测，用于科研实验中对可疑感染者的病原学检测。
【试剂组成】
注： 1） 不同批号试剂不能混用。 2） 试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
【储存条件及有效期】 -20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】 ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】 山羊皮肤病变组织、淋巴结 5g；水泡液取 1mL。
【保存和运输】 上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理 组织：称取样品约 1g，手术剪剪碎，于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100 μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；水泡液直接取 100μL 置于 1.5mL 灭菌离心管中。
1.2 DNA 提取 1) 对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒温处理 10min，13,000 rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存； 2) DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
用量（样本数为 N） 20μL 1μL 将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。
3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL； 荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye） NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置：
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定 设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线。 可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现明显扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性，否则为阴性。 阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
6. 检测方法的局限性
6.1 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
6.2 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
6.3 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
6.4 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
6.5 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
6.6 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定 量检测不准确的结果；
6.7 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
7. 质控标准 阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
【注意事项】
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通 则》进行处理。
山羊痘病毒（GTPV）核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）相关产品：
通用名称：山羊痘病毒（GTPV）核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）
Name ：Goat Pox Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】50T/盒
【预期用途】 山羊痘是由山羊痘病毒（Goat Pox Virus）引起山羊急性热性接触性传染病，世界动物卫生组织将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。病羊是 主要的传染源，主要通过呼吸道感染，也可以通过损伤的皮肤和粘膜入侵机体。饲养和管理人员，以及被污染的饲料、垫草、用具、皮毛产品和体外寄生虫等均可称为传 播媒介。在自然条件下，山羊痘病毒只能使山羊发病。本病传播快、发病率高、不同品种、性别和年龄的羊均可感染。本病一年四季均可发生。 本试剂盒适用于检测山羊皮肤病变组织、淋巴结、水泡液等样本中的山羊痘病毒，用于山羊痘病毒感染的辅助诊断。
【检验原理】 本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对山羊痘病毒特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对山羊痘病毒的核酸进行体外扩增检测，用于科研实验中对可疑感染者的病原学检测。
【试剂组成】
| 包装规格 | 50T/盒 |
| GTPV 反应液 | 500μL×2 管 |
| 酶液 | 50μL×1 管 |
| GTPV 阳性质控品 | 50μL ×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 |
【储存条件及有效期】 -20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】 ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】 山羊皮肤病变组织、淋巴结 5g；水泡液取 1mL。
【保存和运输】 上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理 组织：称取样品约 1g，手术剪剪碎，于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100 μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；水泡液直接取 100μL 置于 1.5mL 灭菌离心管中。
1.2 DNA 提取 1) 对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒温处理 10min，13,000 rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存； 2) DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
| 试剂 | GTPV 反应液 | 酶液 |
| 用量（样本数为 N） | 19μL | 1μL |
3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL； 荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye） NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置：
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
| 1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
| 2 | 40 cycle | 94℃ | 15sec | 否 |
| 55℃ | 30sec | 是 |
5.1 结果分析条件设定 设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线。 可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现明显扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性，否则为阴性。 阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
6. 检测方法的局限性
6.1 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
6.2 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
6.3 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
6.4 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
6.5 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
6.6 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定 量检测不准确的结果；
6.7 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
7. 质控标准 阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
【注意事项】
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通 则》进行处理。
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文献和实验该产品被引用文献
[1] 康文玉, 徐自忠, 高洪等. 羊痘病毒[J]. 中国畜牧兽医, 2004, 31(12)：33-36. [2] 陈轶霞. 羊痘诊断技术研究进展[J]. 安徽农业科学, 2008, 36(34)：15008-15009. [3] 国家质量监督检验检疫总局. SN/T 2452-2010 绵羊痘和山羊痘检疫技术规范[S]. [4] 程振涛, 岳筠, 李永明, 等. 山羊痘病毒TaqMan-MGB 荧光定量PCR 检测方法的建立与应用[J]. 生物工程学报, 2009.
文献支持
山羊痘病毒（GTPV）核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）
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