- ￥100 - 2000
- xuanya
- 中国/美国
- XY-TE-0357
- 2025年11月01日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
One-Step Colony Plasmid DNAOUT
- 库存：
860
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是在xuanya一步式质粒DNAOUT基础上开发的、能够从单个菌落快速提取质粒DNA的产品。它之所以能够从单个菌落中提取到可以用常规电泳方法检测得到的质粒DNA是由于一步式细菌裂解技术能够使细菌释放出其几乎所有的质粒DNA。本产品具有下列特点：
1.不需过夜培养细菌就可以提取质粒DNA，能为研究人员节约一天的宝贵时间。
2.快速，整个过程只需要不到十分钟（对一个样品而言）。
3.一步式裂解细菌，不使用强碱溶液，对DNA损伤小。
4.得到的质粒DNA足够1-2次电泳或酶切实验，足够多次PCR、测序和细菌转化实验。
5.适用于高拷贝、中拷贝和低拷贝的质粒。
一步法96孔板单菌落质粒DNAout(真空法)运输及保存：
常温运输及保存（溶液A需要4℃保存），有效期一年。
自备试剂：无
一步法96孔板单菌落质粒DNAout(真空法)使用方法
1.用吸头挑取一个直径在2mm以上的菌落到100uL一步法单菌落质粒DNAout溶液A中（溶液A用前摇匀），充分吹打或振荡裂解直到裂解液变澄清。
2.直接将裂解液全部转移到离心吸附柱中，室温静置2分钟使质粒DNA与膜结合。室温12000-15000g离心半分钟，弃穿透液。
3.在离心吸附柱中加入0.7mL的通用预洗液，室温12000-15000g离心半分钟，弃穿透液。注意:如果通用预洗液放置在低温产生了沉淀，用前需要加热到60℃左右使之融化，混匀后再用。
4.再在离心吸附柱中加入0.3mL的通用预洗液，室温12000-15000g离心半分钟，弃穿透液。此步预洗最好别省略，否则DNA纯度不高。
5.在离心吸附柱中加入0.7mL的通用洗柱液，室温12000-15000g离心半分钟，弃穿透液。
6.再在离心吸附柱中加入0.7mL的通用洗柱液，室温12000-15000g离心半分钟，弃穿透液。此为第二次洗涤。
7.再在离心吸附柱中加入0.4mL的通用洗柱液，室温12000-15000g离心半分钟，弃穿透液。此为第三次洗涤，如果不洗涤三次，最后得到的质粒DNA的OD260和280的比值达不到1.8。
8.室温12000-15000g离心半分钟，甩干残留液体。注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响后续的电泳上样（DNA沉不到加样孔里去）和酶反应。
9.将离心柱置于一个新的1.5mL自备塑料离心管中，加入30-100uLDNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。如果将DNA洗脱液2.0预热到65-80℃，则效果更好。
10.室温12000-15000g离心半分钟，离心管底部溶液即为质粒DNA，可以直接用于后续实验或放冰箱长期保存。
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文献和实验说Promega和Roche的也不错，用过，的确可以，要不Invitrogen不像当初Gibco时那么牛了，也降价打折了。反转录成功后就不必太小心了，放在那里都可以，想想你还曾经72度灭活呢，是不是？要知道，杂合双链比DNA双链还稳定的。另外把回答的一封信粘上：一般来说要扩增从反转录到PCR全过程的长达2kb以上的片断是相当困难的事（我瞎掰的）,很多长基因是通过随机引物库得到的而不是通过oligo (Td)得到的,不要说反转录,即使是PCR也是很困难的,不信可以从质粒里试试,至于反转录,就更是天方
-5类,OV-1701类, 残留溶剂当然是:PEG-20M;DB-624等相同类别,你们具体的固定液可以参考年美国的固定液分类。 柱子污染后的处理: 1、倒过来直接冲洗,并在冲洗的时候注入适量的甲醇(高纯度的99.99以上,) 2、把柱子拿下来,设计一个溶剂冲洗的部件把柱子接上去,用,加压或真空法把溶剂从柱子中走过,注意:溶剂不能带水,最少3个小时,然后把柱子拿去烘考,可以接到仪器上程序升温度,那么就可以解决,里面残留问题,我以前基本用这个方法解决,固体样品进样的柱子,效果不错, 3、直接
DNA Marker。1~2 V/cm，DNA 从负极泳向正极。电泳至溴酚蓝指示剂接近凝胶另一端时，停止电泳。取出凝胶，紫外灯下观察电泳效果。在胶的一边放置一把刻度尺，拍摄照片。正常电泳图谱呈现一连续的涂抹带，照片摄入刻度尺是为了以后判断信号带的位置，以确定被杂交的 DNA 长度。四、DNA 从琼脂糖凝胶转移到固相支持物转移就是将琼脂糖凝胶中的 DNA 转移到硝酸纤维膜（NC 膜）或尼龙膜上，形成固相 DNA。转移的目的是使固相 DNA 与液相的探针进行杂交。常用的转移方法有盐桥法、真空法和电转移法
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