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赛默飞
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文献和实验时间: 85 min 转膜设备: BIO-rad 转膜设备。其间,准备一个冰盒,将电泳槽半埋到冰里。 转膜液的配制:(2.92 g甘氨酸,5.8 g tris,0.375 g SDS,200 ml甲醇,用双蒸水定容到1 L) 蛋白来源:宫颈癌细胞 蛋白名称:保密 蛋白分子量:60 kD WB用膜类型、孔径:PVDF膜 0.45 uM 转膜方式(恒压、恒流):恒流,按膜的面积来算电流,标准大小的膜-60 mA/张 (8.2 cm x
0.174g 异丙醇 100ml 溶解后,分装于 1.5ml离心管中,-20℃保存。 10%SDS SDS 10g 蒸馏水至 100ml 50℃水浴下溶解,室温保存。如在长期保存中出现沉淀,水浴溶化后,仍可使
6. DMEM(Invitrogen) 7. 胎牛血清(Invitrogen) 8. 青/链霉素(Invitrogen) 9. 6 cm 细胞培养皿(Fisher) 10. 45 um 过滤器(Fisher) 二、仪器 1. 细胞培养箱 2. 离心机 三、实验步骤 1. 6 cm 细胞培养皿中种植293T细胞,细胞密度为1.3~1.5×105,每孔体积6 ml。 2. 孵育细胞24 h(37℃
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