pIEFBPR(同源臂有碱基突变，不影响功能）

质粒与引物设计篇

定向克隆； ③考虑酶的反应条件兼容性：双酶切时，需确保两种酶的反应条件（缓冲液体系、温度、是否有星号活性）是否兼容，从而提高酶切效率； ④需要保证目的基因的阅读框和功能完整：比如构建表达载体时需要通过酶切位点的选择来确保起始密码子与启动子正确衔接与阅读框正确，eg：目的基因的 ATG 需位于载体启动子的下游，且距离合适（通常间隔几个碱基，避免过远影响翻译起始），酶切位点引入的额外碱基需不改变目的基因的阅读框（3 的倍数），否则会导致移码突变，表达错误蛋白。   2. 目的片段太大 (>10kb

Nature 正刊带你解锁单细胞测序对肿瘤免疫治疗的新思路

整合型 CAR-T 细胞（AAVS1-19bbz）。与慢病毒感染 CAR-T 细胞（LV-19bbz）相比，尽管电穿孔过程会导致一些细胞损伤，但并不影响 CAR-T 细胞的增殖和高细胞活力，AAVS1-19bbz 均能在体外和小鼠体内杀伤肿瘤细胞，证明了制备非病毒定点整合的CAR-T 细胞的策略是可行的。 （2）非病毒 PD1 定点整合 CAR-T 细胞对肿瘤杀伤力 基于多项 PD1 敲除可以有效增强 CAR-T 细胞功能的前置研究，团队将目光聚焦到开发非病毒 PD1 定点整合 CAR-T 细胞上来（PD

吸烟越多，DNA 修复能力却可能更强？最新研究揭示为什么大多数吸烟者不会患肺癌

吸烟者（大于 60 包年）的 PBBCs 突变频率并不高于中度吸烟者（20.1~60 包年）。 图片来源：Nature Genetics 为了确定吸烟相关突变的潜在功能影响，他们比较了吸烟者功能性基因组的突变积累率和整体基因组的突变积累率。他们发现，与年龄和吸烟相关的突变在功能基因组中积累的速度比在非功能基因组中慢，这一结果可能可以用功能基因组更有效的 DNA 修复来解释。 图片来源：Nature Genetics 癌症驱动基因突变的分析 虽然体细胞突变通常是随机的，但它们可以基于对其宿主