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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
室温
- 保质期:
24个月
- 英文名:
Beijing Wissen Technology Co., Ltd
- 库存:
50
- 供应商:
北京沃比森科技有限公司
- CAS号:
NULL
- 规格:
VS14544-250g
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文献和实验CRISPR/Cas 是进行基因编辑的强大工具,可以对基因进行定点的精确编辑。在向导 RNA(guide RNA, gRNA)和 Cas9 蛋白的参与下,待编辑的细胞基因组 DNA 将被看作病毒或外源 DNA,被精确剪切。一、寻找目的基因的靶标使用在线设计网站 CRISPR direct,如需直接复制网址,可在生物学霸后台对话框回复 direct即可。靶点挑选要点:基因敲除靶点应设计在起始密码子附近(包括起始密码子)或者起始密码子下游的外显子范围内。不同 Cas9/gRNA 靶点在基因敲除效率
CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 293FT 细胞转染验证 and trouble shooting
前期记录CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 确定目标基因CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 目标基因背景调查CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- sgRNA 及引物设计CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 构建 sgRNA+Cas9 载体golden gate 构建好载体,酶切验证成功293FT 细胞转染验证1. sgRNA+pSpCas9 载体用 lipofectamine 3000 转染至 293FT 细胞(按照转染试剂的说明书走),确保转染效率> 70
。 产芽管试验:挑取1% 吐温80-玉米琼脂培养基上的培养物,接种于加有一滴血清的载玻片上,盖上盖玻片,置湿润的平皿内,置35~37℃、1~3 小时,置显微镜下观察,可见到由孢子长出短小芽管。 2.6 黑曲霉: 23℃-28℃ 培养48-96 小时。菌丛呈黑褐色,粗糙,有黑色孢子产生。 2.7 生孢梭菌: 革兰氏染色试验:革兰阳性梭菌,有或无卵圆形或球形的芽孢。 哥伦比亚琼脂培养基试验:接种于含庆大霉素的哥伦比亚琼脂培养基平板上,置厌氧条件下培养48~72 小时,应生长
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