- ￥14
- 禾午生物
- P53140
- 国产
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
99
- 英文名：
pET-23d
- 保质期：
3个月~12个月
- 供应商：
上海禾午生物有限公司
- 保存条件：
负20℃&负80℃
- 规格：
干粉&甘油菌
| 名称 | pET-23d |
| 质粒宿主 | 大肠杆菌 |
| 质粒用途 | 蛋白表达 |
| 片段类型 | ORF |
| 片段物种 | 空载体 |
| 原核抗性 | Amp |
| 启动子 | T7 |
| 复制子 | pBR322 |
| 拷贝数 | 低 |
| 感受态 | DH5a |
| 温度 | 37度 |
| 正向引物 | T7 |
| pT7-6×His-AFPIII(Atlantic wolffish)-6×His |
| pCasKP-apr② |
| pT7-6×His-AFPIII(Antarctic eel pout)-6×His |
| pBAD-Kan |
| pTZ19U |
| pET-23d |
| pTrp-GFA |
| pT7-StrepII-3C-6×His-MCS-Kan |
| pLac-6×His-T7 RNA polymerase |
| pIX 3.0 |
| pT7-6×His-AFPI(winter flounder)-6×His |
| pLac-maoA(opt-ecoli1917)-HA |
| pDONR+P2r-P3 |
| T7-CMVtrans-EGFP-polyA |
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文献和实验中，现在Invitrogen已经克服了这个问题。在载体上多加四个碱基GTGG，就是这四个碱基使它可以与PCR产物定向连接。其作用机理见下图。 结合TOPO技术的有五个系列载体：pET100/D-TOPO®、pET101/D-TOPO®、pET102/D-TOPO®、pET151/D-TOPO®和pET200/D-TOPO®，这五个载体根据所带的标记、是否具有蛋白酶切位点而各有不同。详细信息参见下图。 结合TOPO技术的有五个系列载体：pET100/D
加热灭活酶。通过凝胶提取试剂盒纯化消化的pET-32α（+）载体骨架和从pMD18-T载体切下的基因片段。用T4 DNA连接酶在23℃下用pET-32α（+）载体骨架连接基因片段1小时，载体末端和插入末端的比例为1：3（fmol）。将10μl连接反应与100μl感受态大肠杆菌 BL21（DE3）在冰上混合10分钟，并将混合物在42℃下孵育90秒。加入800μlLB并在37°C下孵育40分钟。涂在含有100μg/ ml氨苄青霉素的LB平板上。在37°C孵育过夜。通过菌落PCR筛选插入物的存在或制备
dmdfe 本人将GFP基因后面加了一段大约110bp的序列，插入PET28A的BamH1和Hind3位点，最后在BL21中表达。 经SDS-PAGE验证表明： 目的蛋白 大量存在菌体裂解后沉淀即包涵体中，但是该沉淀无色。 少量存在于上清中，上清显微弱的绿色。 看文献大量报道GFP融合蛋白几乎都形成可溶性表达，目的蛋白在上清中，并且诱导条件没有太大要求。 想请教一下各位做过GFP原核表达的经验
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