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- medchemexpress
- P72508
- 2026年01月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
50ug
Ki67/MKI67 位于有丝分裂染色体上，并在核膜解体过程中保持其分散性。它覆盖了染色体表面的很大一部分，并防止染色质塌陷成团。Ki67/MKI67 蛋白, Human (GST) 是重组的 Ki67/MKI67 蛋白，由 E. coli 表达，带有 N-GST 标签。Ki67/MKI67 蛋白, Human (GST) 全长 120 个氨基酸，分子量约为 approximately 36.91 kDa。
| 描述 |
Ki67/MKI67 is localized on mitotic chromosomes and maintains its dispersion during nuclear envelope disassembly. It covers a large portion of the chromosome surface and prevents chromatin from collapsing into clumps. Ki67/MKI67 Protein, Human (GST) is the recombinant human-derived Ki67/MKI67 protein, expressed by E. coli , with N-GST labeled tag. |
|---|---|
| 研究背景 |
Ki67/MKI67 蛋白对于维持核膜解体后单个有丝分裂染色体在细胞质中的分散至关重要。Ki67/MKI67 位于有丝分裂染色体的表面，特别是在染色体周围层内，覆盖了染色体表面的很大一部分，防止染色体塌陷成单个染色质团。作为具有高净电荷的表面活性剂，它建立了空间和静电荷屏障，促进独立的染色体运动。Ki67/MKI67 表现出 DNA 结合能力，显示出对超螺旋 DNA 和富含 AT 的 DNA 的偏好。虽然它对有丝分裂染色体的内部结构没有贡献，但它在染色质组织中的作用仍然不确定，这增加了这可能是其维持分散的有丝分裂染色体的主要功能的间接结果的可能性。该蛋白与各种伙伴相互作用，包括 KIF15、NIFK、PPP1CC，并形成涉及 ZNF335、HCFC1、CCAR2、EMSY、RBBP5、ASH2L 和 WDR5 的复合物的一部分，表明其参与复杂的细胞过程和分子网络。 |
| 种属 |
Human |
| 表达系统 |
E. coli |
| 标签 |
N-GST |
| 蛋白编号 |
P46013-1 (M1-P120) |
| 基因 ID |
4288 [NCBI] |
| 同用名 |
Antigen KI-67; Ki-67; KIA; MIB-1; MKI67; Proliferation Marker Protein Ki-67
|
| 氨基酸序列 |
MWPTRRLVTIKRSGVDGPHFPLSLSTCLFGRGIECDIRIQLPVVSKQHCKIEIHEQEAILHNFSSTNPTQVNGSVIDEPVRLKHGDVITIIDRSFRYENESLQNGRKSTEFPRKIREQEP |
| 分子量 |
approximately 36.91 kDa |
| 纯度 |
|
| 性状 |
无菌粉末. |
| 组分 |
Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution of 20 mM PB, 150 mM NaCl, pH 7.4. |
| 内毒素含量 |
<1 EU/μg, determined by LAL method. |
| 复溶方法 |
It is not recommended to reconstitute to a concentration less than 100 μg/mL in ddH2O. For long term storage it is recommended to add a carrier protein (0.1% BSA, 5% HSA, 10% FBS or 5% Trehalose). |
| 保存条件 & 期限 |
Stored at -20°C for 2 years. After reconstitution, it is stable at 4°C for 1 week or -20°C for longer (with carrier protein). It is recommended to freeze aliquots at -20°C or -80°C for extended storage. |
| 运输条件 |
Room temperature in continental US; may vary elsewhere. |
| 文件资料 |
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文献和实验1 重组蛋白分类 A. 按蛋白分类
a. 细胞因子和生长因子 (Cytokines and Growth Factors)
b. 免疫检查点蛋白 (Immune Checkpoint Proteins) c. CAR-T 相关蛋白 (CAR-T Related Proteins)
d. CD 抗原 (CD Antigens)
e. Fc 受体蛋白 (Fc Receptor Proteins)
f. 受体蛋白 (Receptor Proteins)
g. 酶&调节子 (Enzymes & Regulators)
h. 补体系统 (Complement System)
i. 泛素相关蛋白 (Ubiquitin Related Proteins)
j. 病毒蛋白 (Viral Proteins)
k. 生物素标记蛋白 (Biotinylated Proteins)
l. 荧光标记蛋白 (Fluorescent-labeled Proteins) m. GMP 级蛋白 (GMP-grade Proteins)
n. 无动物成分重组蛋白 (Animal-free Recombinant Proteins)
o. 其他 (Others)
5
重组蛋白表达体系对比
2 重组蛋白表达体系
重组蛋白表达体系主要有:大肠杆菌，酵母细胞，昆虫细胞，哺乳动物
细胞和无细胞表达系统。
3 重组蛋白纯度和浓度测定
重组蛋白纯度测定方法:a. SDS-PAGE 测定法;b. HPLC 测定法;c. 银染测定
法。
重组蛋白浓度测定方法:a. Bradford 蛋白定量测定法;b. BCA 蛋白定量测定 法;c. SDS-PAGE 蛋白定量测定法。
标签 纯度>95%，浓度通常在
10 mg/mL
需要保存蛋白的天然活 性
一般要求尽量保存天然 序列，具有天然活性
2/3 是原核表达体系，1/3 是昆虫细胞表达体系与哺 乳动物细胞表达体系
原核表达体系和真核表达 体系
真核表达体系
B. 按种属分类 表达体系
a. 人 (Human) 原核体系
b. 小鼠 (Mouse)
c. 大鼠 (Rat) 哺乳动物细胞 d. 猴 (Rhesus Macaque)
e. 猕猴 (Cynomolgus) 酵母细胞 f. 猪 (Porcine)
g. 狗 (Canine) 昆虫细胞 h. 牛 (Bovine)
k. 猫 (Cat)
l. 病毒 (Virus)
m. 非洲爪蟾 (Xenopus laevis)
n. 其他 (Others)
优缺点
繁殖快、成本低，产量高，但不能进行糖基化修饰， 常为包涵体
结构与天然蛋白最接近，完善的翻译后加工，活性 更好，但表达水平较低，周期长，技术要求高
易操作，蛋白背景弱，适合大规模生产，便于纯化， 但存在产量不高以及糖基化达不到要求等问题
功能与天然蛋白相似，对于部分有毒性或较难表 达蛋白有优势，但糖基化程度低，形式比较单一， 活性不如哺乳动物细胞表达系统
不受细胞结构限制，尤其适于激酶、膜蛋白和毒性 蛋白的表达，且步骤少具有周期短、通量高的特点， 但不能进行糖基化修饰
i. 羊 (Sheep)
j. 兔 (Rabbit) 原核无细胞体系
6
重组蛋白表达体系选择
研究目的
用作抗原，获 得特异性抗体 用于检测
蛋白质结晶及 晶体结构研究
蛋白的功能研 究
用于药物研究 的蛋白质
蛋白要求 最适表达系统
纯度>80%，不需要蛋白 原核表达体系 修饰或天然活性，可带
4 重组蛋白运输状态
为防止冻干粉产品的粉末沾在管壁或管盖上，使用前请勿开盖，离心 (约 13000 rpm) 处理 20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。MCE 保 证每管产品的蛋白总量达到标示含量。
8 重组蛋白复溶
对于冻干形式的重组蛋白，分装储存或使用前需要进行复溶。
a. 使用前先离心 10,000-12,000 rpm 高速离心 30 s，使附于管盖或管壁的 蛋白收集于管底。
MCE 的大部分重组蛋白产品为冻干粉，在室温环境中都是稳定的，一般采用 蓝冰或是室温运输。液体产品一般采用干冰运输。
7
重组蛋白开盖使用前处理
b. 离心之后，向冻干粉中加入提供的复溶缓冲液，用移液枪轻吹混匀，或将 管盖盖好后轻柔颠倒数次进行混匀，低速离心数秒。重悬至浓度不低于 100 μg/mL。勿涡旋剧烈振荡。
c. 复溶后的重组蛋白在室温放置数分钟，以保证蛋白能够充分溶解。
12 重组蛋白活力值与计算方法
MCE 重组蛋白的生物学活性 (ED50) 测定数据在 COA 中可以获得。ED50 是 Effective Dose 50 的缩写，是可诱导 50% 最大反应的蛋白浓度 (ng/mL)。计
d. 短期实验 (不超过 7 天)，用复溶缓冲液直接溶解的重组蛋白液体可在 2-8°C 保存 1 周。不建议复溶后直接冻存。
e. 如需长期保存，可使用包含一定浓度载体蛋白0.1% BSA，5% HSA，10% FBS，或 5% 海藻糖的溶液或培养基复溶产品，无血清实验需求时，可更换为 5% 海藻糖溶液作为载体。分装后冻存于 -20oC ~ -80oC，可保存 3~6 个月。 注:1. 冻存时，蛋白浓度不低于 100 μg/mL，且每管的体积不可小于 20 μL。 2. 保存产品时请避免反复冻融，冰晶会破坏重组蛋白的空间结构，导致蛋白 变性形成多聚体或使蛋白构象发生改变，从而降低蛋白的结合能力，也加快 了蛋白的降解速度。
算公式如下:
Specific Activity ( Units )= 106 mg ED50
(
ng ) mL
9
重组蛋白储存
保存条件 产品形式
储存温度
储存时间
重组蛋白产品并未采用 WHO (National Institute for Biological Standards and Control) 设定的标准来测定活力值，以上计算公式并不适用 于“International Units”和“ED50”的转换关系，需要采用国际标准品对比相 同实验获得该重组蛋白的 IU 值。
重组蛋白 ED50 值的批间差 不同批次的产品或不同实验方法的测定都会导致重组蛋白产品的 ED50 值变
化，我们推荐客户根据自己的实验测定得到最合适的实际 ED50 值。 14 重组蛋白应用方案
MCE 重组蛋白产品的 COA 中显示的实验方案只是确认该产品的 ED50 值，但 并不与终端客户的不同类型实验结果存在等效性。如果客户需要应用在不 同于本公司产品测试的实验方法时，我们建议客户通过实际测试获得最佳 ED50 值。
重组蛋白的种属交叉活性
重组蛋白的种属交叉活性需要根据具体产品而定;建议尽量选择对应种属 的重组蛋白。如实在无法匹配种属，以下信息供参考:
a. 大多数人细胞因子对小鼠细胞有效 (仅少数例外)。
b. 多数小鼠细胞因子对人细胞有效，但特异性可能不强。如小鼠的表皮生长 因子 (EGF) 对人的表皮细胞有活性，对人的其他种类细胞可能也有作用。
c. 干扰素、GM-CSF、IL-3、IL-4 具有种属特异性，即重组人的这些细胞因子只 能作用于人细胞，对小鼠和大鼠等其他种而重组小鼠的这些细胞因子也仅 用于小鼠，对人的细胞无效。
d. 成纤维细胞生长因子 (FGFs)、神经营养素 (Neurotrophins，如 BDNGF、 GDNF、CNTF、β-NGF 等)、TGF-β 等高度保守，各种属间交叉活性强。
收到的产品肉眼无法看到重组蛋白
冻干的体积大小受冻干前缓冲液组分、盐离子浓度、产品浓度等影响。由于工 艺原因，蛋白冻干粉产品会呈现粉末状或肉眼不易观察到的透明薄膜状、胶冻 状、雪花状，这些都是正常现象。此外，在运输过程中，冻干颗粒可能会分散，并 粘附于瓶壁和瓶盖，肉眼无法清楚看到。收到产品后，请先离心，再按照冻干粉 的复溶建议步骤，使用合适的缓冲液，复溶至说明书推荐的浓度，然后进行分 装储存及使用。
13
液体 -20 oC~-80 oC
冻干粉 -20 oC~-80oC 重悬液(初始) 2 oC~8 oC 重悬液(含载体蛋白) -20oC~-80oC 注:分装冻存时，建议选择包含一定浓度载体蛋白的溶 液或培养基复溶产品，产品浓度不低于 100 μg/mL，体 积不小于 20 μL/管。由于每次冻融都会造成蛋白的部分 变性，建议适量分装避免反复冻融。
15
1 年
2 年
1 周
3~6 个月
10 载体蛋白介绍
载体蛋白主要用于提升重组蛋白复溶后的稳定性，同时也有利于避免产品 粘附在管壁上, 例如 HSA, BSA。因为塑料管壁对蛋白有很强的吸附作用，会 导致重组蛋白粘附在管壁不易分离，进而导致溶液中重组蛋白的实际浓度 偏低，最终导致其活性下降。而载体蛋白可以预先封闭塑料管壁上蛋白结合 位点，使重组蛋白不会粘附于管壁。因此长期保存时，在分装冻存前，建议加 入含载体蛋白的溶液(0.1% BSA，5% HSA，10% FBS，或 5% 海藻糖) 的溶 液或培养基，终存浓度不低于 100 μg/mL。
11 重组蛋白标签影响
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蛋白标签指重组蛋白制备过程中与目的蛋白融合表达的蛋白或多肽。重组蛋白产品大部分为无标签状态，但少数重组蛋白产品因为不同目的 需要加有标签。
a. 标签利于蛋白纯化。 b.当目的蛋白无特定抗体直接鉴定，可利用标签进行 Western Blot 或 ELISA 分析方法鉴定。
c. Fc 标签可以提升重组蛋白的半衰期以提高分子的稳定性，同时也能够促 进重组蛋白形成活性二聚体。 重组蛋白标签对蛋白的生物学活性影响存在未知结论，但对大部分检测应用 中，重组蛋白的标签对蛋白本身生物学活性并无影响，所以无需移除。重组蛋白产品进行生物学活性检测，并将数据公示于 COA 中。
baibai17 今天开题，导师问了个问题：ki67为什么叫ki67？当场傻住······恳请各位老师指教！谢谢。 keavin521 The Ki-67 protein was originally defined by the prototype monoclonal antibody Ki-67 (Gerdes et al., 1983),which was generated by immunizing mice
的作用是调控基因表达。例如组蛋白甲基化多导致基因沉默，去甲基化则相反；乙酰化一般是转录激活，去乙酰化则相反。当然，也可在此基础上产生复杂的生物学效应。例如组蛋白去乙酰化酶 HDAC 可影响免疫系统；H3K4me3、H3K9me2 能够调控记忆的形成, 而且 H3K 甲基化与 X 染色体失活、基因组印记和异染色质形成有关；H3 乙酰化通过多种机制调控以来 ATP 的染色质重塑 ，并参与炎症反应；H2A、H2B 泛素化则与 DNA 损害反应有关；而 H3S28 磷酸化与 H3K27 乙酰化可激活转录
Occurs in Aging Human Gut and Slows Gastrointestinal Transit in Mice 的文章，他们通过对人类肠道样本和小鼠进行研究后发现，肠道中 Piezo2 的水平随着年龄的增长而降低，如果 Piezo2 蛋白从肠嗜铬细胞细胞中去除，小鼠的肠道运动就会减慢，导致便秘。 图片来源：Gastroenterology 主要研究内容 Piezo2 在人肠嗜铬细胞中表达 前期的研究发现，肠嗜铬细胞（Enterochromaffin cell, EC
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