线粒体膜电位检测（JC-1）/流式细胞检测

检测原理：

         线粒体膜电位下降是细胞凋亡早期的标志性事件，发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA 断裂）出现之前，一旦线粒体膜电位崩溃，细胞凋亡便不可逆转。
JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电位∆Ψm 的理想荧光探针，可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。JC-1 有单体和多聚体两种存在形式，两者发射光谱不同。在正常细胞内，线粒体膜电位较高，JC-1 聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可产生红色荧光；凋亡早期，线粒体膜电位降低，JC1不能聚集在线粒体基质中，此时 JC-1 为单体，可产生绿色荧光。
通过 JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变可检测到细胞膜电位的下降，可将 JC-1 荧光颜色的转变作为细胞凋亡早期的检测指标。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。

检测优势：

1、操作简便：JC-1染色步骤相对简单，适合于实验室常规操作。

2、灵敏度高：JC-1能够灵敏地反映出线粒体膜电位的变化，从而可以有效地监测细胞凋亡的发生和发展。

3、应用广泛：JC-1适用于多种细胞类型，包括肌细胞和神经元，以及完整组织和分离的线粒体。

4、结果直观：JC-1染色后，可以通过观察荧光颜色的变化来直观地判断线粒体膜电位的状态，其中红色荧光代表健康的线粒体，而绿色荧光则表明线粒体健康状况不佳。

5、兼容性强：JC-1染色后的样品可以直接用于流式细胞术或荧光显微镜分析，无需额外的处理步骤。

综上所述，JC-1染色因其操作简便、灵敏度高、应用广泛、结果直观以及兼容性强等优点，在生命科学研究中得到了广泛的应用。

1、配制JC-1工作液：每20 uL JC-1（500 ×）加入9 mL超纯水稀释 JC-1，涡旋混匀，再加入1 mL JC-1 Assay Buffer（10 ×），混匀后即为JC-1 工作液；

2、配制1× JC- 1 Assay Buffer：用超纯水将JC- 1 Assay Buffer （10 ×）稀释 10倍，配置好的1× JC- 1 Assay Buffer保存于2~8°C；

3、设置阳性对照：用细胞培养液将 CCCP稀释，使CCCP 终浓度为 10 μM，按照用10 μM CCCP孵育阳性对照样本细胞；

4、收集细胞悬液并进行细胞计数，300-500xg 离心5 min，弃上清；

5、用500 uL JC-1工作液重悬细胞，37°C孵育20 min；

6、孵育结束后，300-500 g 离心5 min，弃上清；

7、用预冷的1×JC- 1 Assay Buffer 洗细胞 1 次，300 g离心5 min，弃上清；

8、用预冷的1× JC- 1 Assay Buffer重悬细胞，用流式细胞仪（选用488nm激光，FITC、PE通道接收）进行上机分析。

注：JC-1 单体的最大激发波长为 514 nm，最大发射波长为 529 nm；JC-1 聚合物的最大激发波长为 585nm，最大发射波长为 590 nm。实际观察时，常规设置红色荧光和绿色荧光即可。

结果示例：

 

 

注！送样要求：活细胞，汇合度高于70%（6孔板），多提供两个空白孔，做阴阳性对照，细胞带红光或绿光，不能检测。