含胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)重组蛋白

重组蛋白应用

近年来，重组蛋白的应用有了显著增长，与此同时，用于重组蛋白表达和纯化的技术和产品也得以增长。自从亲和标签融合技术出现以来，多种多样的短肽或蛋白亲和标签极大地方便了外源表达重组蛋白的分离与蛋白质复合体的纯化，已成为蛋白质研究领域不可或缺的工具。多聚组氨酸标签（His-tag）是目前高通量蛋白纯化最普遍使用的亲和标签，His 标签融合蛋白的固定化金属离子亲和层析（immobilized metal-ion affinity chromatography, IMAC）被作为主要的蛋白纯化方法。从重组蛋白

重组蛋白在E.coli中表达及纯化

离心3min。PBS缓冲液清洗一次后同样条件离心后再次收集菌体。每3ml菌液的菌体加入0.4ml结合液悬浮。(二)细菌的破碎1. 加入溶菌酶4μl（100mg/ml），使得终浓度为1mg/ml，放置冰浴中30～60min充分酶解。2. 5000rpm离心5min，收集上清液4℃贮存备用，或接下一步层析纯化。(三)融合蛋白的亲和层析 1. 将瓶内磁珠轻轻摇匀，取出200 μl（含50 μl净磁珠）到离心管中，将离心管插入磁座，磁力吸附约1分钟，弃除所有上清液。　　2. 将离心管从磁座上取下，加入

大肠杆菌重组蛋白复性

实验步骤    1.        制备包涵体   1)        取上述含目的蛋白菌液，4℃，6500 rpm 离心 15 min，弃上清；   2)        将沉淀完全重悬于 0.1 倍菌液体积的 1 × IB 洗涤液，反复混匀；   3)        在细胞裂解的过程中将重悬的溶液置于冰上以防止蛋白受热裂解，可选择超声波裂解或 French Press 法