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文献和实验一、反应曲线 首先,我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图,可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,如下图所示: 二、反应原理 对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
三磷酸胶瞽酶钙―钴法 三磷酸腺苷酶 可水解磷酸与磷酸之间的高能键,而释放大量能量,而磷酸酶是酯酶 ,能水解磷酸与碳酸之间的键。反应式如下: A--P~P~P+H2 O ATPase A―P―P+ H3 PO4 +能量 在生物膜上,ATP酶的功能是参与离子泵的主动运输,因此细胞膜呈强阳性,ATP酶可作为肝细胞早期受损的敏感指标。此酶活性在心肌最高,其次为骨骼肌、肺、肾脏、脑和胰腺。由于各种ATP酶的最适pH值不同,故所用显示方法也不同。下面仅
一、原理用Na2 51 CrO 4 标记靶细胞,若待检效应细胞能杀伤靶细胞,则51 Cr( 铬) 从靶细胞内释出。以γ计数仪测定释出的51 Cr 放射活性,靶细胞溶解破坏越多,51 Cr 释放就越多,上清液的放射活性也就越高,应用公式可计算出待检效应细胞的杀伤活性。二、步骤(以CTL杀伤肿瘤细胞为例):1、效应细胞将分离的外周血T细胞, 培养7d后按照DC:T = 1:10的比例分别加入自身细胞致敏DC,细胞系致敏DC及未致敏DC, 继续培养3-4d后收集T细胞, 此即为效应细胞CTL.2
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