小鼠主动脉血管平滑肌细胞

一、基本信息

细胞名称

小鼠主动脉血管平滑肌细胞

种属来源

小鼠

组织来源

血管平滑肌

生长特性

贴壁生长

细胞形态

成纤维细胞样

细胞简介

小鼠主动脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，小鼠主动脉平滑肌细胞分离自主动脉组织；主动脉是体循环的动脉主干。其运行路径为：升主动脉起于左心室，至右侧第2胸肋关节高度移行为主动脉弓，弓行向左后至第4胸椎体下缘移行为降主动脉；在第12胸椎体高度穿膈的主动脉裂孔移行为腹主动脉，以上为胸主动脉，至第4腰椎体下缘分为左、右髂总动脉；髂总动脉在骶髂关节高度分为髂内、外动脉。主动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。主动脉平滑肌细胞在心血管疾病发生、发展中具有重要作用，以主动脉平滑肌细胞为实验研究对象，探讨心血管疾病相关发病机制是目前研究的热点；体外培养的主动脉平滑肌细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

质量检测

平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光染色为阳性，纯度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等

细胞规格

5x10⁵cells/T25或1mL冻存管

培养基

小鼠主动脉平滑肌细胞完全培养基

培养条件

气相：空气，95%;二氧化碳，5%；温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%

换液频率

每2-3天换液一次

消化液

0.25%胰蛋白酶

细胞货期

现货，1周左右

发货方式

复苏发货（免运输费用）/  冻存发货（需加干冰运输费用）

供应范围

仅限于科研实验使用，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

特别说明

具体操作步骤以随货产品说明书为主

二、细胞培养操作

收货处理

取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，饱和湿度的细胞培养箱中静置2-4h，以稳定细胞状态

传代密度

细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

传代代数

可传3代左右，建议收到细胞后尽快进行相关实验

传代比例

首次传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

传代方法

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min（视细胞消化情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

细胞复苏

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜。第三天换液并检查细胞密度。

细胞冻存

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、注意事项

重要提醒

1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2.在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

3.传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。

到货须知

1.收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。

3.由于运输的原因，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

4.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

四、售后服务

细胞予重发

1. 细胞运输中遭遇的各种问题，细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等，重发。

2. 收到细胞未开封，如出现污染状况，重发。

3. 收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发。

4. 常温发货的细胞静置2小时后，干冰冻存发货的细胞复苏2天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发。

5. 常温发货的细胞静置22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后，出现污染，经核实后，重发。

6. 细胞活性问题，请在收到产品3天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发。

细胞不重发

1. 客户操作造成细胞污染，不重发。

2. 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发。

3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发。

4. 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发。

5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发。

6. 收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发。