- ￥172 - 690
- gelatins/江蓝纯
- JLC-G13286
- 国内
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
2 × Probe qPCR Mix
- 保质期：
3年
- 供应商：
江西江蓝纯生物试剂有限公司
- 保存条件：
低温保存
- 规格：
1 ml / 5×1 ml
| 规格： | 1 ml | 产品价格： | ￥172.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 5×1 ml | 产品价格： | ￥690.0 |
2×Probe qPCR Mix
产品特点
2 × Probe qPCR Mix 是专用于探针法实时荧光定量 PCR 的预混体系，包含热启动DNA Polymerase、PCR 优化的稳定剂和增强剂、dNTPs 和 Mg2+，操作简便，主要用于基因组 DNA 靶序列和 RNA 反转录后 cDNA 靶序列检测，如基因表达分析，拷贝数分析，SNP 基因型分析等，适用于不同类型探针法荧光定量。
它具有下列特点：
1. 高灵敏度：可以精确定量低拷贝模板；
2. 高特异性：最大限度的减少引物二聚体和非特异性产物；
3. 有效性：扩增效率高，CT 值更低。
成份规格
2×Probe qPCR Mix 1ml / 5×1ml
保存条件
-20℃可保存12个月。
使用方法
注 意：
以下举例为常规qPCR反应体系和反应程序，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化）
1. 根据以下表格配置反应体系，总体积为20 μl
|
试剂 |
用量 |
终浓度 |
|
2×Probe qPCR Mix |
10μl |
1× |
|
正义引物 (10μM) |
0.5μl |
0.25μM |
|
反义引物 (10μM) |
0.5μl |
0.25μM |
|
探针(10μM) |
0.5μl |
0.25μM |
|
模板 DNA |
x μl |
／ |
|
ddH2O |
Up to 20μl |
／ |
注 意：
1. 通常引物浓度以0.25 μM 可以得到较好结果，可以在 0.1 ~ 1.0 μM作为设定范围的参考。
2. 使用的探针浓度，与使用的荧光定量 PCR 仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3. 通常 DNA 模板的量以 10-100 ng 基因组 DNA 或 1-10 ng cDNA 为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
2. qPCR 反应程序，两步法 PCR：
|
过程 |
温度 |
时间 | |
|
预变性 |
95℃ |
5min | |
|
35－40cycles |
变性 |
95℃ |
15sec |
|
退火/延伸 |
60℃ |
30sec | |
注 意：
建议采用两步法 PCR 反应程序，若因使用 Tm 值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法 PCR 扩增，退火温度请以 55℃ - 65℃的范围作为设定参考
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文献和实验DNA Probe Purification Protocol
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出问题了？咨询了试剂公司的技术支持，同时也请教了一些师兄师姐。针对原因，他们也给了我一些建议。 下面就开始了我漫长的找原因之路：先从Real-time PCR各个组分找。。。。。。终于陆续排除SYBR GREEN MIX、引物的因素， 最后发现是CDNA模板的问题。然后开始找逆转录的原因。。。。。。排除了super mix的因素，只剩下了 RNA的问题。 RNA的问题，很疑惑？？？ 后来听从了试剂公司技术支持的建议，把RNA跑了下胶，胶上显示我的RNA都降解了。以前我们这RNA都不跑胶的，觉得没必要
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