病毒基因组DNA提取试剂盒

病毒基因组DNA提取试剂盒
产品及特点
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清、病毒原液、鼻咽拭子和无细胞体液中提取高质量的病毒 DNA。独特的缓冲液/蛋白酶 K 体系能迅速裂解病毒，降解蛋白，DNA吸附于硅基质膜上，通过快速的漂洗、离心步骤，去除杂质，得到高纯度的病毒DNA。本试剂盒具有高效、快速、方便之特点，所得病毒 DNA 不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可直接用于 PCR、Real-Time qPCR、印迹等分子生物学实验。
它具有下列特点：
1. 简便快速：1 小时内可获得高纯度的病毒 DNA；
2. 安全：无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂抽提，使用安全；
3. 稳定：所得病毒 DNA 纯度高，重复性好，方便下游应用。
使用方法
自备试剂
无水乙醇。
（注 意：使用前请先在缓冲液 Buffer RW1 和 Buffer RW2 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签）
1. 取 1.5 ml 离心管（自备），加入 20 μl 的 Proteinase K 溶液。
2. 向离心管中加入 200 μl 血清、血浆、病毒拭子保存液或病毒原液、无细胞体液等，再加入 200 μl Buffer GL，涡旋震荡充分混匀。
3. 56℃孵育 10 min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。
4. 加入 250 μl 无水乙醇，涡旋震荡 15 sec，室温放置 5 min，使溶液温度降至室温，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。
(注 意：如果环境温度超过 25℃，无水乙醇应在冰上预冷后使用。)
5. 将一个吸附柱放入收集管中，将上一步所得溶液转移到离心吸附柱中，12,000rpm离心 30 sec，弃收集管中的滤液。
6. 向吸附柱内加入 500 μl 的 Buffer RW1，室温 12,000 rpm 离心30 sec，弃收集管中滤液。
（注 意：在 Buffer RW1 浓缩液中按要求加入无水乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）7. 向吸附柱内加入 600 μl 的 Buffer RW2，室温 10,000 rpm 离心30 sec，弃收集管中滤液。
（注 意： Buffer RW2 按要求加入无水乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发；如需进一步提高核酸纯度，可重复步骤 7 一次。）
8. 室温 12,000 rpm 离心 2 min，甩干残留液体。
（注 意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响基因组 DNA 的后续使用）
9. 将离心吸附柱置于一个干净的离心管中，小心打开吸附柱的盖子，室温放置2min，使吸附膜完全变干。
10. 加入 30 - 100 μl Buffer RE 或 DEPC-ddH2O，室温放置 2 min。12,000 rpm离心1min，离心管底溶液即病毒 DNA。
（注 意：为增加洗脱效率，可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置2 min，再次离心收集）
注意事项
1. 样品避免反复冻融，否则会使蛋白变性或产生沉淀，导致提取的DNA片段小提取量下降。
4. 如 Buffer GB、Buffer RW1 结晶或产生沉淀，可在 56℃水浴溶解。
5. 所有离心步骤均为室温下操作。