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- 慢病毒质粒
- 上海
- 2026年01月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
瓦兰生物
- 服务名称：
质粒
- 规格：
2ug
pLenti-CMV-GFP-Hottip-SV-puro
货号：JN020100783
慢病毒感染快速指南
1. 将目的细胞按 30%汇合度接种到 24 孔板，约 3-5×104细胞数/孔，不同细胞因为细胞大小不同细胞数量会不同，快速指南以细胞数量为 5×104为例，加入 500uL 完全培养基进行细胞培养。
2. 接种后 12-20h 感染阴性对照慢病毒（接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长，否则细胞增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选）。
3.加病毒量计算方法：（细胞数×MOI 值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量见下表。同时加入 Polybrene，每孔加 0.25uL，浓度为 10mg/mL Polybrene，细胞培养液中终浓度为5ug/mL。
4.感染 16-20h 后更换培养基，弃去培养基，每孔加入 500uL 新鲜的培养基。
5.感染后 48-96h 显微镜观察荧光。（注：如果 48h-96h 期间细胞汇合度达到 100%，请及时传代培养）。
6.建议将 48 孔板细胞进行传代，传代 12 孔板，后继续观察荧光，根据细胞状态和荧光细胞比例综合判断细胞感染最佳 MOI 值。一般选择细胞生长良好，感染效率 80%左右的感染条件作为最佳感染条件。（注：100%荧光感染不一定为细胞最佳 MOI 值，因为可能会造成细胞慢病毒感染拷贝数太高，影响细胞状态。
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文献和实验plenti-CMV-EGFP-LC3 质粒 plenti-CMV-mRFP-EGFP-LC3 质粒 2. LC3 细胞自噬病毒 plenti-CMV-EGFP-LC3慢病毒 plenti-CMV-mRFP-EGFP-LC3 慢病毒 plenti-CMV-EGFP-LC3 腺病毒 plenti-CMV-mRFP-EGFP-LC3 腺病毒 文献支持（部分） 1. Autophagy 10:10, 1-13; October 2014 Endoplasmic
Recombinant DNA Engineering, Or Cloning Genes In Plasmids
have a promoter upstream of the MCS such that the insert gets transcribed. If the promoter is mammalian (e.g., the CMV promoter), the transcription will take place only in mammalian systems (like mammalian cell culture), but not in the bacteria. Plasmids
/ml，确保转染时细胞没有长满或处于静止期。因为转染效率对细胞密度很敏感，所以在不同实验间保持一个基本的传代步骤很重要。铺板细胞数目的增加可以增加转染活性和细胞产量。细胞的融合度必须要达到90%才能做。 05启动子的选择 获得高转染活性所需选择的启动子依赖于选用的细胞系和要表达的蛋白。CMV启动子在大多数细胞类型中可以获得高表达活性。同其他启动子，如SV40和RSV(劳斯肉瘤病毒)相比，在BHK-21中其活性最高。这三种病毒启动子在T细胞来源的细胞系，如Jurkat中组成表达水平较低。转染
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