NCI-H1355

NCI-H1355_人非小细胞肺癌细胞

产品信息

细胞名称：NCI-H1355_人非小细胞肺癌细胞

货号：    SNB-TC-0564

种属来源：人

性别年龄：男性，53岁

组织来源：肺

生长特性：悬浮生长

细胞规格：1 X 10⁶cells/T25或1 mL冻存管

培养条件：DMEM:F12 + 25 mL ACL-4 20X Cocktail + 7 mL Bovine Serum Albumin (Sigma A7979) + Transferrin, 1 mg/mL stock- use 10 µL/1 mL culture medium + EGF, 1 µg/mL stock- use 1 µL/1 mL culture medium.

 

20 X ACL-4 cocktail is made up of

24 mL RPMI

40 mL of 4mg/mL Human Insulin

40 mL of 5 µM Sodium Selenite

8 mL 10 mM Ethanolamine

8 mL of 10 mM Phosphorylethanolamine

7 uL 30 µM Triiodo-L-thyronine

40 mL of 100 mM Sodium Pyruvate

80 mL 1 M HEPES

80 mL 200 mM L-glutamine

80 mL 5 µM Hydrocortisone

 

To prepare a 1mg/mL Transferrin stock solution, aseptically combine:

1 vial of Transferrin containing 100 mg (sterile lyophilized)  (Sigma T-1147)

100 mL serum free medium EMEM (ATCC 30-2003) or RPMI-1640 (ATCC 30-2001)

 

To prepare a 1 µg/mL EGF stock solution, aseptically combine:

1 vial of 10 µg Gibco™ EGF (ThermoFisher Scientific PHG0314)

10 mL PBS with 0.1% BSA (150 mL Ca/Mg free PBS + 0.15 g BSA) or equivalent

37℃， 5% CO2

冻存条件：90% FBS + 10% DMSO

传代方法：1：3传代，2-3天传1代

细胞培养操作

干冰运输：收到细胞后需立即转入液氮保存、或者-80°C冰箱短期冻存、或者直接复苏

常温运输：收到细胞后，请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出，并按照下方操作步骤进行培养传代

细胞传代：细胞密度达80% - 90%，即可进行传代培养

培养瓶中细胞操作步骤

 对于贴壁培养的细胞，寄送前，我们会将培养基充满整个培养瓶，以减少产品运输过程中贴壁细胞的脱落。

1.     收到细胞后，请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。因为运输过程中存在颠簸，且有些细胞对温度变化也很敏感，可能存在一些细胞脱落漂浮的情况，这些细胞仍是活细胞，请勿丢弃，可离心富集后传代使用。

2.     对于贴壁细胞，在生物安全柜环境中，用真空泵去除培养瓶中多余的培养基，至剩余5-8mL 左右，随后根据培养基选择合适的CO2含量的37℃恒温培养箱中培养，拧松瓶盖。如果细胞已经长满培养瓶，请立即传代。

3.     对于悬浮的细胞，在生物安全柜环境中，转移培养瓶中的细胞至离心管，150 g 离心 5 分钟，去除上清后，用5 mL培养基吹散细胞，转移至新的培养瓶中，随后置于合适的CO2含量的37℃恒温培养箱中培养。

冻存管细胞操作步骤

注意： 为保证细胞的高活率，请收到产品后，立即解冻培养。

1.     将冻存管置于37℃水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约1分钟。

2.     一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用酒精喷拭冻存管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。

3.     将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中，150 g 离心 5 分钟，用真空泵去除上清。

4.     用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率，请将培养基在37℃水浴预热后使用。

5.     将细胞置于含有合适CO2的37℃恒温培养箱中培养。

贴壁细胞传代培养

1.     吸取并弃掉培养瓶中培养基，加入PBS润洗一次。

2.     加入1 mL 0.25 (w/v) Trypsin-EDTA 溶液，并置于37℃培养箱中孵育，直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3-5分钟。

3.     加入2mL完全培养基中和胰蛋白酶，并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落，并使细胞分散。

4.     将细胞悬液收集到15mL离心管里，150 g 离心 5 分钟，用真空泵去除上清。取适量的培养基将细胞重悬，转移到新的培养瓶中培养。

悬浮细胞传代可参考以下方法：

一、直接传代法

1.       待悬浮细胞长满至 80%～90%（细胞悬液变黄），即可传代；

2.       用吸管吸弃细胞悬液 1 / 2~1 / 3；

3.       加入适量的新鲜培养基，继续培养。

 二、离心传代法（在发现有细胞碎片的情况下）

1.       将细胞悬液转移到离心管内；

2.       150 g 离心 5 min，弃去上层清液；

3.       使用新鲜的培养基重悬细胞；

4.       吸管吸取适量细胞悬液，装入新的培养瓶，再加入适量的新鲜培养基，继续培养。

细胞冻存操作

1.       1000rpm离心5分钟去掉上清。加1 mL血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1 x 10⁶/mL，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识；

2.       将冻存管置于程序降温盒中，放入-80°C冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。