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20148
Thermo Scientific LightShift 化学发光 EMSA 试剂盒是一种非常可靠、灵敏的电泳迁移率变动实验 (EMSA) 系统,用于鉴定和表征蛋白-DNA 结合相互作用。该试剂盒包括用于设置和定制 DNA 结合反应的试剂、用于检测试剂盒系统的一组 DNA 和蛋白提取物、用于生物素标记 DNA 靶标的稳定链霉素亲和素-HRP 偶联物以及用于检测的一种极其灵敏的化学发光底物模块。
LightShift 化学发光 EMSA 试剂盒的特点:
•非常适合检测细胞核提取物中的低丰度蛋白
• 灵敏度超过放射性和di高辛方法
• 与先前为常用 DNA-蛋白相互作用建立的结合条件兼容
• 包括 EBNA 控制系统以帮助新用户开发工作检测方法并了解用于确认结合相互作用特异性的方法
LightShift EMSA 检测的原理类似于 Western 印迹。生物素末端标记的双螺旋 DNA 与细胞核提取物或纯化因子一起孵育并在天然凝胶上电泳。然后快速(30 分钟)将 DNA 转印到阳性尼龙膜上,进行紫外交联,用链霉素亲和素-HRP 偶联物进行探测,并与底物一起孵育。可在一天内完成从标记到得出结果。
蛋白与 DNA 的相互作用是控制许多细胞过程的关键,包括 DNA 复制、重组和修复、转录和病毒组装。研究基因调控和确定蛋白:DNA 相互作用的核心技术是电泳迁移率实验 (EMSA)。
EMSA 技术基于以下观察结果:在进行非变性聚丙烯 酰胺或琼脂糖凝胶电泳时,蛋白:DNA 复合物的迁移速度比无 DNA 分子慢。因为 DNA 迁移率会根据蛋白结合率发生偏移或速度减慢,因此,该实验也被称为凝胶偏移或凝胶延迟实验。直至 EMSA 蛋白:DNA 相互作用主要通过硝酸纤维素过滤柱结合试验进行研究。
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文献和实验----------------------- xixi76120 wrote: yfyu1963 : 我目前准备做EMSA,检测猪的转录因子NFKB,E2F,我不想用同位素检测方法,听说化学发光法效果不错,我想请教一下:1 两者在实验操作中步骤有何大的区别么?2 化学发光法用特殊的远红外检测仪么?3 上述两种转录因子能用一个试剂盒作么?4 检测猪的转录因子与鼠和人的主要困难在哪里?需要注意点什么东东呢? 问题多了点,谢谢
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