N-2 Supplement (100X)

碧云天生产的N-2 Supplement (100X)，即N2添加剂(100X)，是一种化学成分确定(Chemically defined)的经过滤除菌的100X浓缩型细胞培养添加剂。N-2 Supplement具有促进细胞生长和存活的作用，常用于神经元、神经干细胞、神经瘤细胞等的培养，以及多能干细胞的培养和定向分化[1-4]。

本产品组分与Bottenstein's N-2 formulation一致[5]，也和Thermo的N-2 Supplement (100X) (17502048、17502001)的组分一致，含有饱和转铁蛋白(Human holo transferrin)、重组胰岛素(Insulin recombinant full chain)、孕酮(Progesterone)、腐胺(Putrescine)、(Selenite)等。

胰岛素(Insulin)在哺乳动物细胞的合成代谢方面起重要作用，可以促进细胞对葡萄糖和氨基酸的吸收、脂肪的生成、一价阳离子和磷酸盐的转运、蛋白和核酸的合成，并促进细胞增殖；转铁蛋白(Transferrin)是铁离子的重要载体，可以减少自由铁离子、氧自由基和过氧化氢的毒性；是谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase)及其它一些重要酶的辅助因子，同时在培养基中起抗氧化的作用；孕酮对细胞有生长刺激作用；腐胺作为一种非蛋白质含氮碱，是多胺、亚精胺和精胺的前体，可能是细胞分裂过程中所必须的一类生长因子[5, 6]。

本产品为细胞培养级别，配制于细胞培养级超纯水中，经过过滤除菌，可以直接用于细胞培养等用途。使用前不必再进行过滤等除菌处理。

本产品无支原体，多种传染病指标如HIV 1&2、Hepatitis B、HCV等均为阴性。

本产品作为Neurobasal培养基的添加剂，对ICR小鼠胚胎大脑神经元促生长效果如图1所示。

图1. N-2 Supplement (100X) (C0335)对ICR小鼠胚胎大脑神经元的培养效果图。体外分离的ICR小鼠胚胎大脑神经元在添加本产品的Neurobasal培养基中培养5天后，使用特异性识别神经元的小鼠单抗Neuronal Class III β-Tubulin (Tuj1)抗体(小鼠单抗) (AT809)作为一抗、Alexa Fluor 488标记山羊抗小鼠IgG(H+L) (A0428)作为二抗进行免疫荧光染色。Tuj1免疫荧光和DAPI的叠加(Merge)效果见图C。检测结果显示神经元生长良好，细胞之间以高密度的轴突网络交互连接，部分模拟了体内神经元突触形成以促进信息交流和长期存活的特性。本图仅作参考，实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异。

本产品添加到DMEM/F12中，用于新生SD大鼠大脑皮层神经元的培养效果和T公司同类产品(Competitor)效果相近(图2)。

图2. N-2 Supplement (100X) (C0335)对新生SD大鼠大脑皮层神经元的促存活效果。体外分离的新生SD大鼠皮层神经元用添加本产品的DMEM/F12培养基培养7天后，使用特异性识别神经元的小鼠单抗Neuronal Class III β-Tubulin (Tuj1)抗体(小鼠单抗) (AT809)作为一抗、Alexa Fluor 488标记山羊抗小鼠IgG(H+L) (A0428)作为二抗进行免疫荧光染色。Tuj1免疫荧光和DAPI的叠加效果(Merge)见图C。检测结果显示本产品即使在组分相对简化的DMEM/F12基础培养基中，神经元存活仍然维持7天以上，且和国际上T品牌(Competitor)的同类产品性能相近。本图仅作参考，实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异。

每5ml本产品，可以用于配制成500ml含N-2 Supplement (1X)的培养基。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
C0335-5ml	N-2 Supplement (100X)	5ml
C0335-25ml	N-2 Supplement (100X)	25ml
-	说明书	1份

保存条件：

-20℃避光保存，至少1年有效。4℃避光保存，1-2周内有效。

注意事项：

本产品经过严格除菌过滤，为无菌产品，必须在超净台内使用，以避免微生物污染。

本产品须尽量避免光照。本产品充分融解并混匀后，如有必要，可以适当分装后-20℃避光保存。短期内如果频繁使用，可以4℃避光保存，并建议在1-2周内用完。

本产品长时间存放可能会出现少量沉淀，可上下颠倒混匀，完全溶解后即可正常使用。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。