StarLighter RNA 宽范围检测试剂盒

StarLighter RNA BR Assay Kit

For use with Oubite Fluorometer(all models) or licroplate Reader

产品简介:
StarLighter RNA BR (Broad Range) Assay Kit是一种简便快速、灵敏、准确度高的RNA 荧光定量检测试剂盒。本试剂盒包含荧光检测试剂、RNA标准品和缓冲液，对RNA有高度选择性，在20-1000 ng之间有良好的线性关系，相比于传统的紫外检测(A260)方法，可更精确的对RNA进行定量，免除其它物质的干扰，如蛋白质、盐类物质、洗涤剂等具有良好的耐受性，提高实验的准确性。本试剂盒换作简单，可使用荧光酶标仪或Qubit荧光定量仪进行检测。

产品优势:
宽范围:可以对浓度为20-1000ng的RNA样品进行精确定量:特异性强:本试剂盒对一些常规的污染物，如盐、游离的核苷酸、蛋白质、溶剂、去污剂等都具有极好的耐受性。
操作简便性:操作简单，将荧光检测试剂用缓冲液希释成工作液，然后加入待测RNA样品，通过Oubit荧光仪进行检测，此换作在室温下即可进行。

实验步骤:
1、使用Qubit*荧光仪进行RNA定量检测分析
1.1使用前，将试剂盒中的各组分放至室温。检查QB组分是否有沉淀，若有沉淀物，可将该试剂置于37°C水浴锅中温育，并轻柔混匀直到沉淀物完全溶解。使用前各组分均蒂混匀。
1.2制备检测工作液。取试剂盒中的荧光试剂RNABRFlorescentReagent QE 按照1:199的比例用BRBufer QB进行稀释，配制成检测工作液，现配现用。(例如检测5个RNA样品，且每个样品设置一个复孔)，同时需要2标准品，需配制12个样品工作液(12QF+2388 μLBR Bufer QB，涡旋混匀，制各成检测工作液)。

1.3 向分析管中加入新鲜配制的检测工作液，标准品每管190川，待测样品每管180--199山(根据加入待测样本量而定，总体积200)

注意:仅可使用0.5 mLPCR的薄壁分析管

1.4 向分析管中分别加入10 uL RNA BR Standard OS0和10 uL RNA BR Standard Os1，以及加入一定体积( 1-20 uL)的待测RNA样本，使管中总体积达到200 uL，涡旋晨荡2-3秒使溶液充分混匀。标记RNA标准品和待测样品的分析管。

1.5 将分析管置于室温环境下避光静置孵育2分钟。
1.6 按照Qubit* 荧光仪的操作说明，选择 RNA BroadRange 检测程序测定荧光信号值

2、使用荧光酶标仪进行RNA定量检测分析
2.1 在使用前，将试剂盒中各组分平衡至室温

2.2 制备检测工作液。取试剂盒中荧光试剂RNA BR Fluorescent Reagent QF，按照1:199的比例用BR Bumer OB进行稀释，配制成检测工作液，现配现用。(如检测5个RNA样品，且每个样品设置一个复孔，同时需要5个标准品，可由标准品OS1系列稀释，释液建议用 BR Bufer QB，浓度范围0ng/u~10ng山)，需配制15个样品工作液(15 LQF+2985BRBufer QB，涡旋混匀，制备成检测工作液)

2.3 向96孔酶标板中加入新鲜配制的检测工作液，标准品每孔190川，待测样品每孔可添加 180-199 uL工作液。
注意:推荐使用黑色酶标板，可有效降低反应孔之间的荧光干扰。

2.4 取试剂盒中的Standard OS1标准品，按浓度梯度进行稀释，制成一系列稀释的RNA标准品。
2.5 向96孔酶标板中加入梯度浓度的RNA标准品以及待测RNA样品，用移液枪轻轻吹打混匀.。

2.6将酶标板置于室温环境下避光孵育2分钟，使用荧光酶标仪检测荧光信号值，选择合适的检测波段:激发波长(Ex)设置在620nm左右，发射波长(Em)设置为660nm左右。
2.7 测得的梯度浓度RNA标准品的荧光信号值分别对应其浓度，绘制标准曲线;将测得的未知浓度RNA样品的荧光信号值代入标准曲线中，可计算RNA样品浓度。

注意事项:
1.检测试剂和RNA标准品，每次使用前需摇匀。
2.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。请务必在规定时间内完成所有样品的检测，避免荧光淬灭导致的结果偏差。
3.每次使用Qubit  荧光仪进行检测时，必须用配套试剂的标准品重新标定，请使用校准后的移液器，以保证结果的准确性。
4.如待测样品浓度高于1000 ng/uL，请适当稀释后再进行检测。
5.使用Oubit荧光仪进行检测时，需使用0.5m薄壁透明的分析管。