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- 2026年04月21日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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200
- 保质期：
一年
- 供应商：
武汉金开瑞生物工程有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
10T
实验原理
膜体系酵母双杂是基于分离的泛素(split-ubiquitin)介导的膜蛋白酵母双杂交系统，该系统可用于膜蛋白-膜蛋白或膜蛋白-胞质蛋白之间的互作检测。
泛素是一种含76个氨基酸的保守蛋白，它经常作为降解信号连接在蛋白质的N端。泛素能被其特异性的蛋白酶(ubiquitin-specific proteases, UBPs)识别并从所连接的蛋白上切割下来，切割位点总是位于泛素蛋白的C端。
在酵母细胞中，泛素可以分成两部分单独表达，即其N端部分(NubI, 第1~34位氨基酸)和C端部分(Cub, 第35~76位氨基酸)，后者融合有能启动核内报告基因表达的LexA-VP16蛋白。
野生型NubI和Cub具有高亲和力，并且可以自发重组形成异源二聚体。但是当野生型NubI的第13位Ile被Ala或Gly取代后，NubI和Cub就不能自发结合，因此，NubG（I13G）和Cub-LexA-VP16只有依靠bait和prey相互作用进行连接形成完整的泛素分子，然后诱导UBPs识别并于其C端进行剪切，从而释放出转录因子LexA-VP16，最终启动核内报告基因（HIS3、ADE2、LacZ）的转录
实验流程
试剂盒组分
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文献和实验蛋白编码基因，只要其表达的蛋白能与目的基因相互作用，同样可通过转录激活结构域激活RNA聚合酶，启动下游报告基因的转录。 酵母单杂交原理示意图 2.酵母单杂交技术的特点 酵母单杂交体系自1993年由Wang和Reed创立以来，在生物学研究领域中已经显示出巨大的威力。应用酵母单杂交体系已经验证了许多已知的DNA与蛋白质之间的相互作用，同时发现了新的DNA与蛋白质的相互作用，并由此找到了多种新的转录因子。近来，已有应用酵母单杂交体系进行疾病诊断的研究报道
运用Cell Based Elisa检测信号通路蛋白和磷酸化蛋白
results of phosphorylated proteins磷酸化的试剂盒中的抗体是经过大量筛选，选取了高特异性和低背景的抗体。p-P38MAPK抗体是基于P38的磷酸化Thr180到Tyr182这个位点多肽片段所制备。P-JNK抗体是基于人的Thr183和Tyr185.这个抗体可以同时识别P-JNK1和P-JNK2.我们在运用Cell Based Elisa P38和JNK两个试剂盒做检测的同时，又用传统的WB方式来验证这个结果。经过反复验证，都得出了同样的结果， Cell Based
液（8 cm × 8 cm 的膜加 5 mL 即可），将膜的背面贴紧杂交瓶壁，正面朝向杂交液。放入 42 ℃ 杂交炉中，使杂交体系升到 42 ℃。取经超声粉碎的鲑鱼精 DNA（已溶解在水或 TE 中）100 ℃ 加热变性 5 min，迅速加到杂交瓶中，使其浓度达到 100 μg/mL。继续杂交 4 hr。鲑鱼精 DNA 的作用是封闭 NC 膜上没有 DNA 转移的位点，降低杂交背景、提高杂交特异性。2．杂交倒出预杂交的杂交液，换入等量新的已升温至 42 ℃ 的杂交液，同样加入变性的鲑鱼精 DNA。将探针
技术资料
