pLV3-CMV-Armcx2-3×FLAG-CopGFP-

pLV3-CMV-Armcx2-3×FLAG-CopGFP-Puro

货号：JN020401198

慢病毒感染实验

1.感绿贴壁细胞

a）将对数生长期的状态良好的细胞接种至所需培养器皿中， 控制细胞接种量使得次日病毒 感染时细胞汇合度 30-

50%。如果细胞增殖较快， 建议接种细胞密度为 30%， 如果细胞增殖较慢， 建议适当增加接种汇合度， 以病毒感染 72h 细胞汇合度未超过 100%为标准。

b）感染当天， 取出细胞， 更换为含有合适浓度｛一般为8 µg /ml ) Polybrene 的新鲜完全培养基。

c）取出病毒于冰上解冻。 根据 MOI 及病毒滴度加入相应的病毒量， 可先用完全培养基稀释。 加入病毒后轻柔 “ 8 ” 字混匀。 当培养器皿底面积较大时， 为增加病毒与细胞接触的几率， 感染时可适量减少培养基体积。 下表为不同细胞培养体系推荐的感染体积及病毒用量｛病毒滴度为1×108 TU/ml ）。

d) 37℃培养12-16h， 更换为完全培养基， 继续培养。 如细胞状况发生明显变化， 可于感染后8h换液， 保证细胞的正常生长。

e）继续培养。 期间观察细胞， 若液体变黄， 可对细胞换液维持细胞活性。

f）感染后72h （ 一般代谢较旺盛的细胞或慢病毒包装容量48h即可观察到荧光， 代谢较慢的细胞可能需要96h甚至更长时间才能观察到荧光），观察感染效率。 如果需要筛选稳定细胞株， 可以根据预实验选用合适的抗生素及合适的工作浓度进行筛选。