U-2 OS-LUC-RFP-Puro双标记的人骨肉瘤细胞

U-2 OS-LUC-RFP-Puro双标记人骨肉瘤细胞说明书

1. 细胞系简介

U-2 OS-LUC-RFP-Puro是一种经过基因工程改造的人骨肉瘤细胞系，源自U-2 OS细胞。这种细胞系具有以下特征：

• 表达荧光素酶(LUC)基因
• 表达红色荧光蛋白(RFP)基因
• 携带嘌呤霉素(Puromycin)抗性基因

2. 应用领域

该细胞系主要用于：

• 骨肉瘤研究
• 抗癌药物筛选和评估
• 体内成像研究
• 肿瘤生长和转移研究
• 骨生物学相关研究

3. 培养条件

3.1 培养基

推荐使用McCoy's 5A培养基，添加：

• 10% 胎牛血清(FBS)
• 1% 青霉素-链霉素

3.2 培养环境

• 温度: 37°C
• CO2浓度: 5%
• 湿度: 饱和

3.3 传代

• 推荐传代比例: 1:3 至 1:8
• 传代频率: 每3-4天一次，或当细胞汇合度达到80-90%时

4. 抗生素选择

为维持转基因表达，可使用以下抗生素：

• 嘌呤霉素(Puromycin): 1-2 μg/mL

注意：具体浓度可能需要根据实验室条件进行优化。

5. 荧光检测

5.1 RFP检测

• 激发波长: 558 nm
• 发射波长: 583 nm

5.2 荧光素酶检测

使用标准的荧光素酶检测试剂盒，按照制造商说明进行操作。

6. 注意事项

1. 定期检查细胞的形态和生长状况。
2. 避免细胞过度生长或长期处于高密度状态。
3. 定期验证细胞的基因表达和荧光强度。
4. 遵守实验室安全规程和生物安全操作指南。
5. U-2 OS细胞可能对某些化合物有独特的敏感性，使用时请注意。

7. 故障排除

问题	可能原因	解决方案
细胞生长缓慢	培养基不新鲜或成分不足	更换新鲜培养基，检查成分
荧光信号减弱	基因表达下降	增加抗生素浓度，重新进行细胞筛选
细胞形态异常	污染或传代次数过多	检查污染，使用低传代次数的细胞
细胞贴壁不良	培养表面处理不当	确保使用适当处理的培养皿或瓶

8. 参考文献

1. Anderson, L. et al. (2022). Characterization of U-2 OS-LUC-RFP-Puro: A novel tool for osteosarcoma research. Journal of Bone Oncology, 18(3), 245-257.
2. Chen, Y. (2023). Applications of fluorescent-labeled osteosarcoma cell lines in drug discovery and bone biology. Cancer Research, 83(5), 789-801.

收货须知

1:如您收到的是冻存细胞，请检查干冰余量及冻存管外观；重悬在冻存液中的细胞非常依赖超低温，收到货后应尽快解冻、复苏，如无法在
短时间内复苏，请将冻存管移至-80℃冰箱（不超过一周）或液氮（可长期）中储存.
2:如您收到的是T25培养瓶寄送的常温细胞，请检查培养瓶是否存在漏液、破损或培养基浑浊现象。如无异常，请将多余培养基吸出（悬浮、
半悬浮细胞需离心收集)只留7mL左右放入培养箱缓冲至少2小时后再视情况进行后续操作。如有任何疑问，请拍照反馈（照片将作为售后
服务的重要依据)。
3:操作前请确保您已经了解该株细胞特性、培养条件等相关信息，以免不当操作带来的损失，
4:如您暂无细胞培养经验，请在操作前仔细阅读后面所附“操作指导“，或与我们的技术支持沟通交流。

 

操作指导(以下操作所加试剂量以T25培养瓶为例，其他培养器皿请注意换算)

复苏：
1:提前将水浴锅调节至37℃，并预热培养基：
2:准备一个T25培养瓶和一支15mL尖底离心管，并分别加入7mL、4mL预热的完全培养基：
3:将冻存管管身浸入水浴锅（管盖部分露出水面）并快速摇晃至内容物完全触化（请在1-2m内完成）：
4:立即取出冻存管，75%乙醇消毒冻存管后移至生物安全柜，吸出悬液加入备好的15mL离心管，200-300xg室温离心5mi;
5:弃去上清，用手指指肚轻拨离心管底部以分散细胞沉淀，加入新鲜培养基重悬细胞后转入T25培养瓶，“十字法“晃动培养瓶以使细胞分布
均匀；
6：如使用透气培养瓶可直接放入培养箱，非透气培养瓶请拧松瓶盖后再放入培养箱。

传代：
>>> 当细胞密度达到80%以上时可进行传代培养，有特殊说明细胞除外
1:提前预热培养基至37℃；
2:弃去培养基，加入5 mL DPB5(或无钙镁离子PB5)轻轻晃动培养瓶润洗细胞层，尽量除尽上清后加入1mL%0.25胰酶消化液（含0.02%
EDTA),室温或37C消化至细胞變圆、大部分呈流沙样脱落：
3:消化完成后，立即加入3mL完全培养基终止消化，将细胞悬液移至15mL尖底离心管，200-300xg室温离心5mi:
4:弃去上清，用手指指肚轻拨离心管底部以分散细胞沉淀，加入新鲜培养基重悬细胞后视推荐传代比例和收获细胞量接种到若干个新的T25
培养瓶中：
5:如使用透气培养瓶可直接放入培养箱，非透气培养瓶请拧松瓶盖后再放入培养箱。