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- 2025年07月10日
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99
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上海圻明生物
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2μg
布氏罗得西亚锥虫PCR阳性对照质粒上海圻明生物优势供应。更多产品资料欢迎免费咨询。
One of the many important uses of PCR technology is that it can be used to label DNA probes with high specific activity. PCR technology has high specificity, and can synthesize probe DNA fragments in quantities within 1~2h if [α-32P]dNTP or other markers are added to the substrate
dNTPs, the probe DNA can be well labeled during DNA synthesis, and the incorporation rate of the marker can be as high as 70%~80%. Therefore, PCR labeling technology is particularly suitable for large-scale detection and non-radiolabeling. The disadvantage of this method is that a specific pair of PCR primers is synthesized.
Labeling can also be achieved by using small fragments prepared from probe DNA as primers.
Solution preparation
1. Prepare a stock solution
Unless otherwise stated, all unused stock solutions should be divided into disposable aliquots and stored at -20 °C after preparation. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
1.1* Acid Stock Solution (125X):
Add 20 μL DMSO to *ate (component B) to make a 125X* acid stock solution.
2. Prepare standard solutions
*Salt standard solution
Add 50 μL of 1 mM KH2PO4 (Component C) to 950 μL of deionized water or enzyme reaction buffer to give a 50 μM * saline standard solution (PS7). A 50 μM * saline standard solution (PS7) was taken and serially diluted 1:2 to obtain a serially diluted phosphate standard with deionized water or enzyme reaction buffer.
3. Prepare a working solution
Add 20 μL of 125X* stock solution to 2.5 mL of sterile H2O and mix well to make a working solution of *salt. Avoid potential Pi contamination. Note: Avoid direct exposure of *salts (component B) to light. Due to the high sensitivity of this assay to Pi, it is extremely important to use Pi-free labware and reagents.
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文献和实验作用从宿主获得营养。所有锥虫均可在体外连续培养。 锥虫是人和家畜重要的寄生虫之一。按其传播方式可分为两大类：①粪便型，通过被后循环锥虫污染的粪便传播;②唾液型,后循环锥虫经唾液腺传播。对人有严重致病作用的锥虫有：罗得西亚锥虫、冈比亚锥虫、枯氏锥虫等。前两者主要流行于非洲各地，引起所谓非洲睡眠病；后者主要分布在南美洲（特别是巴西），引起美洲锥虫病，即夏格氏病。中国至今还没有发现人体锥虫的病例。 对家畜有严重致病作用的锥虫有布氏锥虫、活泼锥虫、刚果锥虫、伊氏锥虫和马媾疫锥虫等。前三者
或者 Ct 值偏大的样本孔，到底是真的没有要检测的对象，还是扩增有问题，亦或是提取中的问题？为了发现这种假阴性的发生，合理的阳性对照可以监控实验的不同步骤： 扩增对照 Amplification Control 可使用含有扩增片段的质粒、假病毒或者基因组 DNA/cDNA 作为扩增阳性对照，监控荧光定量 PCR 的体系是否正常，包括酶、引物、探针等。如果检测中包含多个目标片段，可以将这些目标片段都克隆到同一个质粒中，方便制备和使用。当扩增对照没有扩增，或者 Ct 值大于预期，则说明定量 PCR
检测时都可能检测到一些非目标条带。可以通过电泳检测酶切之前的质粒判断质粒的质量，排除可能的原因。 调整酶切温度、时间、buffer 体系等，可以解决酶切杂带或切不开的问题。 6. PCR 扩增不出条带/条带弱/非特异条带怎么办？ ①检查模板 DNA 是否存在降解，此外模板的上样量过高或者过低，也会影响片段的扩增； ②重新设计引物，比如引物与非目标序列同源性高可导致非特异扩增或无扩增产物，引物自身形成发夹结构、引物二聚体从而影响模板结合等。可以借助专业性软件检查引物结构并重
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