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- 2025年07月15日
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低温
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详见说明
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99
- 供应商：
上海圻明生物
- 规格：
2μg
山羊分枝杆菌PCR阳性对照质粒上海圻明生物优势供应。更多产品资料欢迎免费咨询。
One of the many important uses of PCR technology is that it can be used to label DNA probes with high specific activity. PCR technology has high specificity, and can synthesize probe DNA fragments in quantities within 1~2h if [α-32P]dNTP or other markers are added to the substrate
dNTPs, the probe DNA can be well labeled during DNA synthesis, and the incorporation rate of the marker can be as high as 70%~80%. Therefore, PCR labeling technology is particularly suitable for large-scale detection and non-radiolabeling. The disadvantage of this method is that a specific pair of PCR primers is synthesized.
Labeling can also be achieved by using small fragments prepared from probe DNA as primers.
Solution preparation
1. Prepare a stock solution
Unless otherwise stated, all unused stock solutions should be divided into disposable aliquots and stored at -20 °C after preparation. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
1.1* Acid Stock Solution (125X):
Add 20 μL DMSO to *ate (component B) to make a 125X* acid stock solution.
2. Prepare standard solutions
*Salt standard solution
Add 50 μL of 1 mM KH2PO4 (Component C) to 950 μL of deionized water or enzyme reaction buffer to give a 50 μM * saline standard solution (PS7). A 50 μM * saline standard solution (PS7) was taken and serially diluted 1:2 to obtain a serially diluted phosphate standard with deionized water or enzyme reaction buffer.
3. Prepare a working solution
Add 20 μL of 125X* stock solution to 2.5 mL of sterile H2O and mix well to make a working solution of *salt. Avoid potential Pi contamination. Note: Avoid direct exposure of *salts (component B) to light. Due to the high sensitivity of this assay to Pi, it is extremely important to use Pi-free labware and reagents.
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文献和实验【摘要】 目的 建立结核分枝杆菌的荧光定量PCR检测方法，探讨荧光 PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法 根据结核分枝杆菌基因保守序列设计引物和探针，并构建标准品。对102例培养涂阳的结核痰液标本和45例非结核感染者的痰标本，应用荧光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌。结果 荧光定量 PCR、抗酸染色法检测结核分枝杆菌的特异性分别为100%、30%。结论 荧光定量PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法，具有重要的应用
臂区域如果 GC 含量过高过低，或者有重复序列，都可能在核酸外切酶切割后形成发卡结构，影响重组效率，可以使用质粒设计软件来检查同源重组臂的设计。 ⑤插入序列本身的问题：有些序列本身存在连接载体困难、连接产物不稳定、连接产物在大肠杆菌中复制困难等问题。对于这类序列可以考虑将序列打断后分步构建，或者更换载体或感受态的方式尝试解决。 2. 质粒提取量不足 质粒提取量少常见的原因可能是： ①摇菌时间过长：大肠杆菌生长已经超过对数期，细菌老化，导致细胞和 DNA 降解。 ②摇菌时间不足：细菌生长不充分
重组插入目的片段，启动子，终止子等是构建完整表达框时所需要的元件，标签序列等可以用于表达鉴定等实验。在质粒载体设计及构建工作中，根据实验的需求情况可以增减质粒载体上的具体元件，以及插入实验需要的相关基因。 2、质粒载体构建的常规流程 通常质粒载体构建的操作需要经过下图所示流程。其中目标序列确定需要根据实验需求以及查阅生物信息数据库的相关序列来确定。目标序列 PCR 扩增则根据实验需求以基因组 DNA 或者反转录得到的 cDNA 为模板，经过高保真 PCR 实验扩增得到相关目的片段。质粒载体确定由实验
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