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- 2025年07月16日
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详见说明
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99
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上海圻明生物
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2μg
番鸭细小病毒PCR阳性对照质粒上海圻明生物优势供应。更多产品资料欢迎免费咨询。
One of the many important uses of PCR technology is that it can be used to label DNA probes with high specific activity. PCR technology has high specificity, and can synthesize probe DNA fragments in quantities within 1~2h if [α-32P]dNTP or other markers are added to the substrate
dNTPs, the probe DNA can be well labeled during DNA synthesis, and the incorporation rate of the marker can be as high as 70%~80%. Therefore, PCR labeling technology is particularly suitable for large-scale detection and non-radiolabeling. The disadvantage of this method is that a specific pair of PCR primers is synthesized.
Labeling can also be achieved by using small fragments prepared from probe DNA as primers.
Solution preparation
1. Prepare a stock solution
Unless otherwise stated, all unused stock solutions should be divided into disposable aliquots and stored at -20 °C after preparation. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
1.1* Acid Stock Solution (125X):
Add 20 μL DMSO to *ate (component B) to make a 125X* acid stock solution.
2. Prepare standard solutions
*Salt standard solution
Add 50 μL of 1 mM KH2PO4 (Component C) to 950 μL of deionized water or enzyme reaction buffer to give a 50 μM * saline standard solution (PS7). A 50 μM * saline standard solution (PS7) was taken and serially diluted 1:2 to obtain a serially diluted phosphate standard with deionized water or enzyme reaction buffer.
3. Prepare a working solution
Add 20 μL of 125X* stock solution to 2.5 mL of sterile H2O and mix well to make a working solution of *salt. Avoid potential Pi contamination. Note: Avoid direct exposure of *salts (component B) to light. Due to the high sensitivity of this assay to Pi, it is extremely important to use Pi-free labware and reagents.
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文献和实验） 拯救方法： ①确定甲醛浓度，将交联时间缩短至 10 分钟或更短。 ②在交联之前计算平板上细胞的数量，以确定准确的细胞数量； ③适当延长染色质消化时间。 疑难杂症3：样品输入对照组 PCR 反应中无产物 拯救方法： ①向 PCR 反应中添加更多 DNA 或增加扩增循环次数。 ②优化实验引物的 PCR 条件或设计小于 150 碱基对的引物扩增。 ③为获得最佳 ChIP 结果，每次 IP 添加 5-10 μg 染色质。 结合此结果图，阳性对照组条带清晰无杂带，阴性对照组正常，表明ChIP
或者 Ct 值偏大的样本孔，到底是真的没有要检测的对象，还是扩增有问题，亦或是提取中的问题？为了发现这种假阴性的发生，合理的阳性对照可以监控实验的不同步骤： 扩增对照 Amplification Control 可使用含有扩增片段的质粒、假病毒或者基因组 DNA/cDNA 作为扩增阳性对照，监控荧光定量 PCR 的体系是否正常，包括酶、引物、探针等。如果检测中包含多个目标片段，可以将这些目标片段都克隆到同一个质粒中，方便制备和使用。当扩增对照没有扩增，或者 Ct 值大于预期，则说明定量 PCR
检测时都可能检测到一些非目标条带。可以通过电泳检测酶切之前的质粒判断质粒的质量，排除可能的原因。 调整酶切温度、时间、buffer 体系等，可以解决酶切杂带或切不开的问题。 6. PCR 扩增不出条带/条带弱/非特异条带怎么办？ ①检查模板 DNA 是否存在降解，此外模板的上样量过高或者过低，也会影响片段的扩增； ②重新设计引物，比如引物与非目标序列同源性高可导致非特异扩增或无扩增产物，引物自身形成发夹结构、引物二聚体从而影响模板结合等。可以借助专业性软件检查引物结构并重
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