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哺乳动物细胞表达的难点和解决方案，都帮你整理好了

型的蛋白，或进行高解析度的结构分析，愈来愈多的实验组选择哺乳类表达系统来生产融合蛋白。其原因为哺乳动物细胞生产出的重组蛋白与人类蛋白十分相似，有较完整的蛋白折叠、组合及翻译后修饰[3]。因此，愈来愈多科学家们更加关注于—如何从哺乳类细胞中高效的纯化目标蛋白。1 亲和标签的选择首先，需考虑选择合适的亲和标签。常用于哺乳动物表达系统的亲和标签有 His-tag、FLAG-tag、GST-tag及 Strep-tag® 等[4-12]，整理于下表：（点击放大查看）这些亲和标签在使用上各有千秋。使用

鼠脑RNA提取、RT－PCR及GST融合蛋白纯化

限度地抑制提取过程中内源性及外源性RNA酶对RNA的降解。 1．外源RNase污染可通过预先采取措施避免。 ①实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶污染，用0.1%DEPC的水溶液浸泡用于制备RNA的烧杯，小指管、PCR管和其他用品。浸泡12h后，121℃高压灭菌30min（2次），70℃—80℃烘干。 ②取鼠脑的剪刀、研钵、镊子等干热灭菌：160℃，2小时。 2．内源RNase在一些组织中，如胰腺中相当丰富，内源RNase活性

利用植物蛋白质芯片研究蛋白磷酸化

位点的序列，包括肽库和肽芯片 [5，6] 的多种技术可用来鉴定激酶底物。此外，一种 λ 噬菌体 cDNA 表达文库的固相磷酸化筛选 [ 7，8 」以及不同蛋白质相互作用筛选方法，如覆盖方法 [ 9，11] 和酵母双杂交系统 [ 12，14] 已被应用在这方面。最近，蛋白激酶被改造成可接受人工合成的腺苷三磷酸盐（环戊基 ATP ) 模拟物，并用于鉴定特异底物。初步的研究已经证明，通过激酶来研究磷酸化的蛋白质芯片是可行的 [ 18，19] 。为了确定磷酸化位点，抗磷酸化蛋白表位 [6] 的抗体将用于蛋白