All-in-One RT MasterMix (with

产品描述

All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)是一款高效、便捷且高质量的单链 cDNA 合成试剂盒，包含热稳定的 M-MLV GIII 逆转录酶及其反应缓冲液、RNA 酶抑制剂、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和随机引物等所有逆转录反应所需组分，仅需添加 RNA 模板和水即可启动反应，生成的 cDNA 主要用于后续的 qPCR 分析。

提取的RNA 样本常存在基因组DNA（gDNA）污染，可能导致gDNA 与 cDNA 在 qPCR 中同时扩增，影响定量准确性。本试剂盒通过 dsDNase 高效去除gDNA，特异性降解双链 DNA或DNA-RNA 杂合链中的 DNA 链，并在逆转录温度下快速不可逆失活。与传统使用的 DNase I对比，无需额外 EDTA 处理，简化实验流程，降低逆转录反应的抑制风险。

本试剂盒可在同一管中进行逆转录和gDNA去除两个反应，操作简便，可有效降低复杂加样过程造成的样品污染和 RNA 降解的风险。但若基因组污染严重程度，建议选择采用去除gDNA 污染与逆转录分开进行的操作方法。

订购信息

产品名称	货号	规格
All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)	AN33L718	20T
All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)	AN33L719	100T

产品组分

组分	AN33L718（20T）	AN33L719（100T）
A.  All-in-One   RT MasterMix	80 μL	400 μL
B.  dsDNase	20 μL	2*50 μL
C.  10×   dsDNase Buffer	40 μL	200 μL
D.  Nuclease-Free   Water	400 μL	2*1 mL

运输与保存

蓝冰运输。-20℃保存，有效期24个月。

使用方法

1. 针对基因组 DNA 含量低的 RNA 样品（推荐方案）

① 于冰上配制如下反应体系：

试剂	使用量
模板 RNAa	50   ng~1 μg
All-in-One   RT MasterMix	4 μl
dsDNase	1 μl
Nuclease-Free   Water	To 20   μl

a . 推荐使用试剂盒提取的高质量 RNA 作为模板。

② 37℃温育 2 min，以去除gDNA 污染；

③ 55℃温育 15 min；

④ 反应结束后，85℃温育 5 min 以终止反应；

⑤ 迅速将获得的 cDNA 置于冰上，用于后续实验；或立即保存于 -20℃。

2. 针对基因组 DNA 含量高的 RNA 样品

(1)  基因组 DNA 污染去除

① 于冰上配制如下反应体系：

试剂	使用量
模板 RNAa	50   ng~1 μg
dsDNase	1 μl
10×   dsDNase Buffer	1 μl
Nuclease-Free   Water	To 10   μl

a.    推荐采用试剂盒提取的 RNA 作为模板。

② 轻柔吸打混匀，瞬离；

③ 37℃温育 2 min，以去除基因组 DNA 污染；

注：若 RNA 中基因组 DNA 污染严重，可适当延长 37℃温育时间至 5 min。

④ 65℃温育 2 min，使 dsDNase 失活， 冰上放置。

(2)  第一链 cDNA 合成

① 于冰上配制如下反应体系：

试剂	使用量（实验组）
“实验 (1)”反应产物	10 μl
All-in-One   RT MasterMix	4 μl
Nuclease-Free   Water	To 20   μl

② 轻柔吸打混匀，瞬离；

③ 50℃温育 15 min；

注：若目标 RNA 不含 Poly(A) 结构，可预先 25℃温育 10 min。

④  反应结束后， 85℃温育 5 min，以终止反应；

⑤ 将获得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后续实验。

注：cDNA 溶液置于 -20℃储存，建议不超过 1 周；置于 -80℃可长期储存。

注意事项

1. 预混液中已包含 Oligo(dT)20VN 和随机引物，适用于含有 Poly(A) 结构的真核生物 mRNA，以及不含 Poly(A) 结构的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板，但不适用于 miRNA 等小RNA模板。

2. 由于随机引物会在RNA的任意位置启动逆转录，因此不建议使用本产品进行真核生物全长cDNA的克隆。

3. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。